牛抗幽门螺杆菌抗体对幽门螺杆菌感染防治作用初步研究.pdfVIP

中文摘要 牛抗幽门螺杆菌抗体对幽门螺杆菌感染的 防治作用的初步研究 摘 要 ef 目的：自1983年Marshallal酋先从胃粘膜分离出 菌与慢性胃炎、消化性溃疡存在密切相关，并被WHO列 为一级致癌因子。人群rfl Hp的感染率高达50％，但由于 临床抗生素滥用和耐约菌株的FJ益增多，目前抗HD感染 重点已转向免疫预防和治疗。山‘1：牛乳可以增JJ|J IgG的稳 定性，fl其虑川安全、J1‘泛，『大l此应刚含特异性抗Hp抗 体的免疫乳防治Hp感染，可能足lJ服抗体麻用。J：免疫防 治的新心蹄。小椰}究从体J』J和体外(整体和细胞)等1iJ刊 彬IIJf4搜lc卡JJj步{4【弗0． 方法： l l 637 SSl、NCTCI12i株n”卉养和执原制备：SSl发 NCTCll637采川ffn．、li板f0代扩增。7e体条什：85％Nb 1 集Ji：洗涤3次．反复冻融，，瞰声粉碎肝测Pr，低温保存益 州。 2个抗Hp抗体的制备、分离、纯化及黎定：Hp巡声 个黼执原接种奶牛，拔多克降抗体制备常规，腋卜．皮+卜接 J 种，个羁!免疫肝j4卜2J加灶一次，琼脂舣|fIJ扩散令l：32 中文摘要 时可采集牛血制备抗血清，同期收集牛常乳。抗血清及牛 乳低温保存备用。经50％、33％、33％饱和硫酸铵粗提后 沉淀用生理盐水溶后对生理盐水透析24小时，上 ．20℃保存备用。 3 迹分析：lip超声上清(Pr u 泳：分离胶12％、成层胶5％、上样量20l(样本处理液 毕NC膜置5％脱脂奶粉封闭过夜，加一抗，HRP-二抗，室 温振摇4小时，DAB显色5．10分，蒸馏水终止显色。 生长增殖功能的中和作用：通过Hela生长曲线确定Hela 生长增殖功能的抑制作用的MTT分析方法，以牛抗Hp NCTCll637菌体蛋白的中和作用。 究：a、造模：取SSl48小时新鲜培养物以布氏肉汤稀释 5％NaHC030．2ml灌胃，5分后以SSl0．4ml／只滋胃，共 鼠HD感染率检测：分别于接种后4周、6周、8周处死 若干动物，作如下处理：I摘眼球取血II取胃组织后， 沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗后，取一半胃组织作分浆， 中文摘要 分浆次数4“下，匀浆浓度20％，接种至选择性培养基 4．0mg 100gt (VancomycinPolymyxing 3—5天，气体及温度条件同1．III取另一半胃组织的纵 贲门、胃体、胃窦和部分十二指肠，分别作HE染色和 组及干预措施：自接种后4周确定Hp定植后即开始治疗 实验(括号内为干预措施给予时间)，设标准三联治疗对 照组(2周)、正常牛乳对照组(6周)、免疫乳治疗组(6 周)、纯化IgG治疗组(6周)、模型对照组。预防实验自 造模开始即予免疫乳和正常牛乳(对照)共10周。标准 治疗结束后4周，处死全部动物，作病理切片、分离培养、 尿素酶试验及组织涂片。D、取血清和胃组织匀浆测鼠lgG 和抗HpIgG：以Hp超声令芮包被榆测板，包被浓度l0ug 板，包被浓度10ug ELISA检测小鼠总IgG。 结果： l 牛抗Hp抗体的免疫印迹图谱显示8条免疫反应条带，低 KD) 分子量(32l①)条带染色清晰，较高分子量(45 中文摘要 染色较浅。 细胞增殖，但对于相同的细胞毒效应SSl所需浓度高于 NCTCll637的细胞毒作用