愈肝颗粒抗肝纤维化及其对Smad4、Smad7影响实验研究.pdfVIP

愈肝颗粒抗肝纤维化及其对Smad4、Smad7影响的实验研究 摘 要 目的：通过研究愈肝颗粒对肝纤维化大鼠肝组织中Smad4、 Smad7蛋白分布与量的影响，结合肝功能、肝纤维化血清学指标及病 理的检测，探索愈肝颗粒抗实验性大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。 方法：Wistar大鼠90只随机分为9组，分别为正常对照四、六、八 周组；模型对照四、六、八周组；愈肝颗粒四、六、八周组。用0．5％ 进行腹腔注射(共10次)复制成肝纤维化模型，正常对照组用等体 积生理盐水腹腔注射。实验第四周末，处死全部四周组动物。从实验 第五周起，愈肝颗粒组给予愈肝颗粒浸膏0．55ml／1009灌胃(相当于 成人临床用药剂量的6．5倍)，1次／天。正常对照组及模型对照组用 清洁自来水0．55ml／1009灌胃，1次／天。分别于第六、八周末处死模 型对照组和愈肝颗粒组的六、八周组动物，收集血清及肝组织作标本， 作肝功能ALT、AST、ALB及肝纤维化血清学指标透明质酸 fHyaluronic 观测肝组织病理学变化并进行肝脏炎症活动度和纤维化程度计分，作 Smad4和Smad7的免疫组织化学染色观察其表达的量及分布的变化， 并用图像分析软件对它们表达的阳性区域面积(Positivearea，PA)及光 密度(Optical 正常对照四周组与正常对照八周组比较：ALT、AST、ALB、HA、 和OD值比较，PO．05。病理切片显示两组肝组织的肝小叶结构都 正常，未见炎性细胞浸润及肝细胞坏死，无纤维组织增生。免疫组化 显示：Smad4在两组的肝细胞内都无表达，在Disse问隙、汇管区及 非实质细胞内可见少量表达，Smad7JI在两纽的肝细胞胞质内明显表 达。故实验时的腹腔注射、灌胃、抓取等处理因素对造模无影响。② 模型对照四周纰与jF常埘照U_川纰比较：模州对j瞰四周纰ALT、AST、 HA、LN、肝组织炎症活动度和纤维化程度计分明显升高，ALB明显 降低，以上均PO．01。肝脏炎症坏死及纤维化明显。免疫组化Smad4 阳性区域增宽，在门静脉和中央静脉周围、纤维间隔及炎性细胞中广 泛分布，PA和OD值明显增高；而Smad7阳性区域明显减少，着色 浅淡，只在少数肝细胞及扩大的纤维间隔内的梭状细胞内分布，PA 和OD值也明显降低。以上P值13．01，差异有显著性。③模型四周 组分别与模型六、八周组比较显示：AST、ALT、ALB、肝组织炎症 活动度、纤维化计分，均Po．05。HA、LN随造模时间延长增高， 在八周组最高，P值均D．01。肝组织病理改变显示：六周组炎症坏 死最明显，八周组炎症活动度减轻，而纤维化程度在三组间差异不大。 免疫组化显示：六周组Smad4阳性染色区域最广，伴染色团块状增 其余各组的PA和OD的P值均O．05。(2)愈肝颗粒治疗情况：①愈 肝颗粒六周组与四周组的比较： AST、ATL、HA、LN和肝组织炎 症活动度和纤维化程度计分显著降低，PD．01，但ALB恢复不显著， P-0．05。病理切片显示：肝脏炎症及坏死减轻，纤维间隔变细，肝 小叶结构紊乱减轻。免疫组化中Smad4表达减少，着色变浅，主要 位于门脉系统纤维间隔和肝小叶之问的非实质细胞，其PA及OD值 均降低，而Smad7表达明显增多，着色变深，主要分布在肝细胞胞 质中，其PA及OD值也增加，以上P值均D．01，差异有显著性。 ②愈肝颗粒八周组与六周组比较：削LT、AST、HA、LN和肝组织炎 症活动度和纤维化程度计分继续降低，以上均P0．05，ALB也有所 增加，但P0．05。病理切片示：炎症、坏死病变基本消失，纤维化 进一步减少，肝组织结构己基本正常。免疫组化中Smad4的表达继 续减少，着色浅淡，PA及OD值更低；Smad7阳性染色区域继续增 加，有颗粒状着色，肝细胞质内表达丰富，部分肝细胞核膜也有表达， PA及OD值更高，以上P值均D．01，差异有显著性。③正常对照 八周组与愈肝颗粒八周组的比较：Au’、AST、ALB基本恢复正常， P值大于O．05，差异无显著性。但HA、LN和炎症活动度和纤维化程 度仍较正常纰帛，PD．05。炳耻改变!-曼刀÷：愈朋：颗粒8周纰炎症、 坏死病变基本消失，只在汇管区和中央静脉周闱仍然有少量胶原纤维 增生，但肝小叶结构已基本正常。免疫组化r{1Smad4的PA仍较正常 积及着色浓度仍较正常组少，PA及OD值仍低，P值均O．01，差异 有显著性。结论：①DMN腹腔注射能成功诱导大鼠肝纤维化模型， 形成的肝纤维化模型较为稳定，且病理改变类似人类的乙型肝炎，