李红叶性状RAPD标记及CHS基因cDNA的克隆论文.docVIP

摘 要 查尔酮合酶(Chalcone Synthase，CHS)是类黄酮合成途径中的一个关键酶。 CHS 表达量的增加或减少都可能导致植物叶色的变异。本研究利用 RAPD 技术， 筛选出与李属(Prunus)植物红叶性状相连锁的分子标记；并采用同源克隆的方法， 克隆 5 种李属植物查尔酮合酶基因的 cDNA 序列。主要研究结果如下： 1. 以红叶李(P. salicina × P. atropurupurea)和安哥诺李(Prunus salicina cv. ‘angenuo’)为杂交组合，正反交后得到 56 株 F1 代杂交苗。结合分离群体分组分析 法(Bulked Segregate Analysis, BSA)，依据 F1 代杂交苗叶片颜色划分出“红叶”和 “绿叶”两个分离群体，构建“红叶”和“绿叶”两个近等基因池。应用 RAPD 标记技术，用随机引物对两个基因池、父母本及其余 F1 代个体 DNA 进行 PCR 扩 增，筛选与李属植物叶片红色性状相连锁的分子标记。研究结果显示，通过对 350 个随机引物的筛选，获得一个在红叶基因池中能稳定扩增而在绿叶基因池中不出 现的 RAPD 标记，该扩增条带大小约为 2 300 bp，命名为 S450-2 300。经过重复 性验证和 F1 代群体单株验证，该标记片段仅在红叶个体(重组型除去)中出现，表 明与李属植物叶片红色性状相连锁，