瓦里安系列10-瓦里安制备色谱系统概述(2006-7-29)-1.pptVIP

制备液相的重要作用 分析液相 制备液相 强调: 回收样品 过程控制 文件证据的提供 负荷最大化 -体积过载 -浓度过载 自动收集 强调: 定性和定量分析 数据处理 谱图处理 分辨率的最大化 少量多次进样 (自动进样器) 美国瓦里安公司 制备色谱系统概述 临床前/临床试验 g 产品量Kg 化学合成/结构鉴定/ 活性测试mg 瓦里安液相色谱系统 具有30年生产从分析、少量制备到生产规模制备液相经验的 专业公司，在全球范围内已安装400多套大型制备色谱系统 半制备液相色谱 中试规模制备色谱 工业规模制备色谱 分析液相色谱 制备色谱技术 制备色谱的目的是收集更多的 被纯化的产品，而不是用于分 析化合物的组分含量，产量从 几毫克到几公斤 制备色谱技术是得到高纯物的 最好的分离方法之一 制备液相与分析液相的区别 制备色谱规模划分 生产规模制备 色谱柱直径100-600mm 中试规模制备 色谱柱直径41-150mm 小量制备， 色谱柱直径10-50mm mg-g级 g-100g级 100g-kg级 制备液相色谱技术应用领域 有机合成实验室 ( Prep LC/HPLC) 恒容系统/硅胶 (正相色谱) 肽类纯化 梯度系统（HPG or LPG） – TFA/ACN/C18 制药工业 梯度系统（HPG or LPG）– C18/IEX 天然产物纯化 梯度系统（HPG or LPG） –BUFFER/ACN/C18 制备色谱中的重要问题 产品的纯度 处理量 (每单位时间所纯化的样品量) 回收率 生产时间 方法开发与放大 纯化成本 制备色谱分离参数之间的关系 速度 上样量 分离度 上样量 色谱柱规格 填料性质 样品性质 制备色谱方法开发 分析HPLC 传统制备色谱 颗粒 10 μ 40 - 150 μ 长度 25 cm 65 cm 柱直径 4.6 mm 25 mm 流速 1 ml / min 20 ml / min 操作时间 20 min 210 min 消耗溶剂 20 ml 4200 ml 需要方法开发 传统的开发方法 高通量放大－样品相对简单，对产量要求高 x 41.4 mm overloaded 4.6 mm overloaded 4.6 mm x x 线性放大模式 范例：poly-L-lysine 分析和制备分离结果 1. 分析液相分离 (4 x250 mm 色谱柱) 2. 制备液相分离 (50 x250 mm 色谱柱) 方法可预测性 产率可预测性 时间可预测性 成本可预测性 4.6 41.4 mm mm 线性放大－－样品复杂，对产量要求不高 线性放大因子（linear scale-up factor）即为分析色谱柱和制备色谱柱截面积之比 线性放大因子： (41.4 mm/2)2 / (4.6 mm/2)2 = 81 πr2prep / πr2analytical = r2prep / r2analytical 可变参数 不可变参数 流速 填料种类 样品进样体积 样品浓度 样品管尺寸 梯度方式 样品收集体积 温度 检测器流动池尺寸 柱长度 管路内径 柱背压 死体积 操作时间 溶剂消耗 回收率 样品处理量 收集样品的纯度 线形放大过程中的可变与不可变参数 为什么要进行线性放大？ 只需开发一次方法（分析柱上的分离方法） 该方法可直接线性放大到任何尺寸直径的制备柱上 大大减少方法开发过程的时间和成本 减少样品的损失（有时制备时的样品是非常珍贵的） 获得最多的被纯化样品 线性放大是制备色谱最快速高效的方法开发过程 合理简单的放大方法 Step 1 在小直径的分析柱上，进行方法