骨桥蛋白在肾癌中的表达及意义.pdfVIP

中文摘要 骨桥蛋白在肾癌中的表达及意义 摘 要 肾癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤，近年该病的发病率呈升高趋势。肾 癌细胞具有增殖、迁移和侵袭能力，这些作用是肾癌扩散、转移的生物学 基础。因此在更深层次特别是在分子水平研究肾癌的增殖、迁移，对于肾 癌的发病机制、进展过程及治疗方案均有重要意义。骨桥蛋白(osteopontin， OPN)是一种分泌型糖基化磷蛋白，该蛋白参与构成细胞外基质成分，并 与多种细胞膜蛋白发生偶联，参与细胞的迁移及运动过程。该蛋白的异常 表达己被证明与多种疾病有关。然而，OPN与肾癌的关系尚不清楚，本 研究通过探讨OPN与肾癌增殖、侵袭的关系，旨在揭示该蛋白在肾癌发 病过程中的重要作用，并为今后肾癌的药物治疗提供新的靶点。 方法： 1 免疫组织化学染色 将组织切片脱蜡至水，使用SP三步法检测组织切片中增殖细胞核抗 cellnuclear 原(proliferatingantigen，PCNA)及OPN的表达变化 2 组织总RNA提取及RT-PCR反应 提取各组织的总RNA，经定量、电泳验纯后进行逆转录反应，之后 将反应产物用特异引物进行PCR扩增。经电泳后半定量检测PCNA及 ‘ OPN的表达变化。 3 人肾癌786．O细胞培养 ‘将786．O细胞传代培养，待细胞生长至80％时进行实验。 4 细胞增殖实验 使用MTT法对各组细胞的增殖活力进行测定，检测OD570值比较各 组间增殖活力差异。采用细胞计数法，对各组细胞进行计数，以验证OPN 对786．O细胞增殖的影响。 5 细胞侵袭实验 将各组细胞传代至Transwell的上室，在下室浸没的溶液中并加入不 同浓度的OPN，计数侵袭入下室薄膜上的细胞个数。 中文摘要 结果： 1 OPN表达水平与肿瘤细胞增殖能力相关 因此，OPN的表达水平与肿瘤的增殖能力可能有关。 2 OPN增强786．O肾癌细胞的增殖能力 MTT及细胞计数结果表明，用人重组OPN蛋白对786一O细胞进行 处理，细胞的增殖活性明显增强，细胞数目明显增多(PO．05)。 3 OPN增强786．O肾癌细胞的侵袭能力 侵袭入下室的细胞数目明显增多(Po．05)，因此推测OPN与肾癌细胞的 侵袭有关。 结论： 1 OPN的表达水平与肾癌细胞的增殖能力成正相关。 2 OPN增强肾癌细胞的增殖及侵袭能力。 关键词：骨桥蛋白；肾癌；增殖；侵袭；增殖细胞核抗原 英文摘要 ——————————-——————————————————————————————————————————————-————一一一_一 Enhances Proliferation Osteopontin andInvasionofRenal Cam recnaslleC ells ABSTRACT Renalcancer isacommon ofwhich isclear urologicalcarcinoma，most cell carcinoma．Similarasmost renalcancercells malignanttumors，the a