低温胁迫下水稻幼根乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶基因表达变化.pdfVIP

江苏农业科学 2012年第40卷第3期 -—·—43-—·— 梁 燕，严建萍，谭湘陵．低温胁迫下水稻幼根乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶基因表达变化[J]．江苏农业科学，2012，40(3)：43—45 低温胁迫下水稻幼根乙醇脱氢酶和 乙醛脱氢酶基因表达变化 梁 燕 ，严建萍 ，谭湘陵 (1．南通大学生物工程研究所，江苏南通226019；2．南通高等师范学校，江苏南通226001) 摘要：为研究低温胁迫下水稻幼根中乙醇脱氢酶 (ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)基因表达变化 ，选取南粳44号水 稻种子，常规促发芽，待幼根发至长lcm时，将其随机分为对照组和试验组 ，分别置于25℃和5℃环境下，两组均分别 在0、6、12、24、48、96h取根 ，提取RNA，逆转录，用荧光定量PCR法测定ADH和ALDH基因的表达量。结果显示ADH 和ALDH表达量均呈现出先降后升的变化趋势；试验组的表达量均显著高于对照组。结果表明水稻ADH和ALDH在 低温胁迫下表达量升高可能与低温抗逆性有关。 关键词：ADH基因；ALDH基因；低温胁迫；表达 中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2012)03—0043—02 低温易造成水稻幼苗死苗或僵苗，严重地威胁着水稻的 加入 RNAisoPlus1mL充分抽提研磨 ，至裂解液呈透明状。 生长发育，造成减产可达 10％～50％ J。其原因可能是低温 转入离心管中，室温静置5min，加入0．2mL三氯甲烷，再室 使植物光合作用减弱，呼吸作用增强，能量产生和物质合成受 温静置5min，12000g离心 15min后吸取上清液；加入等体 阻，消耗增多，植物处于饥饿状态，严重影响了植物正常生长 积异丙醇，室温静置 10min，12000g离心 10min，弃上清液； 发育，甚至导致死亡。植物对低温的响应是一种积极主动的 用75％乙醇洗涤沉淀，12000g离心5min，弃乙醇，然后用适 应激过程，低温通过诱导相关基因的表达来提高植物的抗性。 量的DEPC水溶解 RNA。 迄今，低温诱导蛋白质主要还是通过分析其与已知蛋白质的 1．3．2 反转录反应 取各个样品总 RNA1 进行反转录， 同源性及一些生理现象确定-z。低温诱导蛋 白质除少数被 依次加入 5×Buffer2IxL、Mix0．5 L、随机引物0．5 L、RNA 确定为植物适应胁迫过程中的必需蛋白质外，大部分的功能 1 ，DEPC水补足体积，反应 总体积 10 。37℃保温 及其表达机制仍不清楚。本试验研究了南粳44号水稻在 15min，85℃ 10S终止反应，一2O℃保存。 5oc低温下乙醇脱氢酶 (alcoholdehydrogenase，ADH)、乙醛脱 1．3．3 荧光定量PCR反应 根据 GenBank中注册的目的基 氢酶(aldehydedehydrogenase，ALDH)基因的相对表达量变 因ADH(AB267278)、ALDH(AF162665)和 内参基 因Actin 化，以期为水稻的抗寒机理研究和耐冷育种提供理论依据。 (X16280)序列 ，按照荧光定量 PCR引物设计原则设计引物。 ADH的正向引物为 5 一AGGGGGTGACGGAGCT兀℃CC一3， 1 材料与方法 反向引物为5一AGTcGcGccAAATccGGTGG一3，预期产物 1．1 试验材料 长度为323bp；ALDH的正向引物为5GGGGACGTACGAGCTC 南粳44号水稻种子，由江苏沿江地区农业科学研究所提 CGCG一3，反向弓I物为 5GCCACCATTGGTACTTCAATCTGG 供 ，常规促发芽，待幼根 1em时，移至人工气候箱中。试验组