1株鸽新城疫病毒的分离、鉴定及生物学特性研究.pdfVIP

一 8一 养禽与禽病防治 2012年第3期 孔 ，从第 10孔吸取 25p~L弃去。稀释后每排第 1～1l 1．2．5 动物回归试验及病理切片观察 孔再加入 251xL4HAU抗原，反应 5～10min，最后加 F6代病毒尿囊液经 10稀释，通过滴鼻和肌肉 入 1％红细胞悬液 25p~L，用微量振荡器混匀，室温 注射的方式对 30日龄左右的 10只雏鸽进行攻毒， 下静置 30～40min。 肌肉注射0．5mL／只。另设5只健康鸽作为空白对照。 1．2-3 病毒ELD 的测定 攻毒后观察每组鸽的发病和死亡情况 ，观察2周，并 将分离的病毒尿囊液 F6代用无菌生理盐水作 对发病及死亡鸽做组织病理学观察。 l0倍系列稀释，取 10 ～10】5【个稀释度分别经尿囊 2 结果 腔途径接种 5枚 10日龄的SPF鸡胚 ，0．1m 胚，置 2．1 病毒分离、鉴定结果 37℃孵育96h，24h前死胚为非特异性死亡 ，废弃不 2．1．1 各代次鸡胚尿囊液HA效价 计 ，记录 24～96h内死亡鸡胚 ，按 Reed—Mueneh法 病料滤过液接种的 10枚 SPF胚中，有6枚于 计算其ELD 。 24～72h内死亡，胚体充血、出血，逐胚测定各代次 1．2．4 毒力的测定 鸡胚尿囊液HA效价 ，F1～F6各代尿囊液平均HA 1．2．4．1 脑内接种致病指数(ICPI)测定 效价分别为2 、2 、2 、2 、2 、2。。 将分离的病毒尿囊液 F6代以灭菌生理盐水稀 2．1-2 血凝抑制(HJ)试验结果 释 10倍 ，脑内注射出壳后 24～36h的SPF雏鸡 10 鸡胚尿囊液血凝性仅被NDV的标准阳性血清 只，每只0．05mL，同时设5只对照(脑内注射灭菌生 所抑制 ，而不被禽流感 (H5、H7、H9亚型)及 EDS76 理盐水 0．05mL)，隔离饲养 ，观察 8d2[1。记录正常、发 标准阳性血清所抑制。 病与死亡鸡的每 日累计数，正常鸡积分为0、发病为 2．2 F6代病毒尿囊液病毒含量的测定结果 1、死亡为2，最后计算 ICPI，ICPI= (8d累计发病 经测定，该分离株的ELD 为 10-~．6o0／．1mI。 数 Xl+8d累计死亡数X2)8／d累计鸡只总数。 2．3 毒力的测定结果 1．2．4．2 静脉接种致病指数(IVPI)测定 经测定 ，该分离株的ICPI为 1．64，IVPI为 2．2， 将分离毒种 F6代以灭菌生理盐水稀释 10倍 ， MDT为44．1h。 翅静脉接种42dSPF鸡 10只，每只0．1mL，同时设5 2．4 动物回归实验结果 只对照(静脉注射灭菌生理盐水0．1mL)，隔离饲养 ， 攻毒后4d，所有试验鸽精神沉郁，出现神经症 观察 10d。记录正常、发病、麻痹与死亡鸡的每 日累 状，表现头颈后仰 (观星状 )、歪头 、扭颈及翅膀麻痹 计数，正常鸡积分为0、发病为 1、麻痹为2、死亡为 等，肛门周围粘满绿色粪便。剖检可见肌 胃、腺 胃出 3，最后计算 IVPIL21，IVPI=(10d累计发病数 X1+10d 血，肠黏膜出血，里面充满黄色黏液 ，脑部也见轻微 累计麻痹数X2+l0d累计死亡数 ×3)／lOd累计鸡只 血。组织病理学观察脑部脑膜充血瘀血，血管周同 总数。 间隙增宽，淋巴细胞浸润；脾脏瘀血，大量浆细胞聚 1．2．4．3 MDT测定 焦；肝脏瘀血；肠道固有层大量浆细胞浸润 ；气管分 将分离的病毒尿囊液F6代以灭菌生理盐水分 泌旺盛，固有层瘀血，炎症细胞浸润(图1～5)。 别稀释成 l0～10 ，每个稀释度分别接种9日龄SPF 3 小结与讨论 鸡胚 10枚，每胚0．1mL，37~C继续孵化，弃去 24h内 3．1 根据从发病鸽中分离到病毒具有血凝性，且能 的死胚，以后每天照蛋 3次，记录胚胎残废时间，取 被抗NDV血清所抑制 ，而不被禽流感 (H5、H7、H9 尿囊液测定 HA效价，持续 7d，取全部致死鸡胚的 亚型)及 EDSV76标准阳性血清所抑制 ，