AGEs诱导足细胞表达MCP-1以及细胞内信号传导机制的实验研究.pdfVIP

AGEs诱导足细胞表达MCP—i以及细胞内信号传导机制的实验研究 中文摘要 肾小球疾病中积聚在病交部位的巨噬细胞可以通过释放溶酶体酶，自由氧离 子以及细胞因子等直接损伤肾小球。单核巨噬细胞的迁移聚集与很多趋化因子 如：迁移抑制因子(MIF)、单核细胞集落刺激因子(M。CSF)、骨桥蛋白有关， 其中单核细胞趋化因子一1(MCP．1)的局部生成增多可能是主要原因。抑制肾脏 MCP一1的产生后可以明显延缓肾小球硬化亦证明了MCP．1在肾小球疾病中的作 用。在入肾赃话检标本和动物实验中发现糖尿病肾脏肾脏闻覆和肾小球中巨噬细 胞明显增多，肾脏MCP—l产生也明显增加。肾小球中的固有细胞：血管内皮细 胞、系膜细胞和血管上皮细胞均可以表达MCP．1。体外实验已经证明高糖以及 糖化白蛋白均可以刺激系膜细胞产生MCP．1。使用可溶性晚期糖基化产物受体 (sRAGE)治疗db／db小鼠可显著地减少肾小球中巨噬细胞的数量，而在肾小球 内只有足细胞表达RAGE。因此我们怀疑RAGE配体和足细胞上的RAGE结合 是否能直接诱导足细胞表达MCP—l，并了解RAGE激活后的细胞内信号传导途 径。我们使用条件不朽的小鼠足细胞株进行研究。RT-PCR和ELISA的方法检测 小鼠足细胞的MCP—l的基因表达和蛋白质的产生。应用激光共聚焦显微甓观察 AGEs和CML诱导的细胞内氧自由基(ROS)。Western blotting、EMSA、免疫 细胞染色和免疫组织化学染色等方法检测细胞外信号调节激酶 (extracelluhr-sigml-regulated 依赖的方式诱导足细胞表达MCP一1基因，AGEs刺激足细胞4小时时MCP．1的 mRNA表达达到最高。AGEs和CML均可以以剂量依赖的方式诱导足细胞表达 蛋白，也能以剂量依赖的方式诱导足细胞表达MCP．1。RAGE中和抗体完全阻 断了A(迎s、CML和S100的作用。3、我们发现血清饥饿的足细胞细胞核内存 在基础性的自由氧离子(ROS)，AGEs和CML均可以诱导细胞浆内快速产生 AGEs诱导足细胞表达MCP—i以及细胞内信号传导机制的实验研究 ROS。N．乙酰．L一半胱氨酸(NAC)可以抑制基础的和诱导性的ROS形成，而 RAGE中和抗体则完全抑制诱导性的ROS产生。NAC也直接抑制了CML以及 外源性H20z诱导的MCP．1的表达。使用CML刺激足细胞后10分钟就可以发 现磷酸化的ERK产生，30．60分钟达到最高。直到CML刺激足细胞120分钟仍 预处理细胞可以完全防止ERK的激活并抑制MCP．1基因表达，而PD98059虽 然阻断了ERK的激活却并不能完全抑制MCP．1的mRNA的产生。我们没有发 的刺激足细胞60分钟后，细胞核中的转录因子NF-r．B和Spl增加。ERK的磷酸 化抑制剂PD98059直接抑制NF．r,B的激活，而不影响细胞核内Spl的表达增多。 基因表达。上述结果证明了AGEs和CML可通过RAGE直接诱导足细胞表达 MCP—I。提示细胞内ROS在细胞内信号传导中起关键作用。转录因子NF．r．B和 Spl可直接调节MCP．1的基因转录。 《 AGEs诱导足细胞表达MCP—i以及细胞内信号传导机制的实验研究 Abstract MCP-l is in damage oflocal glomerular involyed Up．regulation production indiabetic recruitment／activation throughmacrophage for