L-精氨酸对急性肺栓塞大鼠作用的实验研究.pdf

中 文 摘 要 L一精氨酸对急性肺栓塞大鼠作用的实验研究 摘 要 目的:一氧化氮 (NO)作为生物体内重要的信使分子 和效应分子参与机体多种生理病理调节。其中，NO在肺 栓塞中起重要作用。利用NO来治疗急性肺栓塞是最近研 究的一个新课题。本实验旨在研究NO供体L一精氨酸对肺 栓塞大鼠的治疗作用。实验分二个部分，分别观察:1, L一精氨酸对急性肺栓塞大鼠肺损伤的影响。2,L一精氨酸对 大鼠急性肺栓塞后细胞凋亡的影响口 方法:体重280-3208的健康雄性SD大鼠，用20%乌 拉坦麻醉，颈正中切开，分离左颈总动脉和右颈外静脉， 左总动脉插管连接压力换能器和八道生理纪录仪，用计算 机化系统记录平均动脉血压。采用导管方法将己制备好的 栓子注入右心房制成大鼠肺栓塞模型。将动物随机分为血 清对照组、肺栓塞模型组、L一精氨酸治疗组，每组6只。 L一精氨酸组于肺栓塞后立即腹腔注射L一精氨酸，模型组给 等容量的生理盐水，血清对照组只通过导管注入血清。于 肺栓塞后1小时，放血处死大鼠，取肺，称重，计算肺重/ 体重。取部分肺组织制成肺匀浆，离心后取上清液，采用 比色法测定丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性，采用比色法测定血浆中NO的含量，采用放射免疫 法测定血浆中内皮素一1(ET-1)和血栓素一2(TXB-2)的浓 度。一部分肺放于10%甲醛中固定，进行HE染色，观察肺 形态学的改变。然后采用TUNEL法检测肺组织细胞的凋亡 中文 摘 要 J清况，采用免疫组化法和 Westenblot法测定肺中 caspase-3蛋白的表达。一部分肺置于70%的酒精中，采用 流式细胞分析仪 (FCM)观察肺中细胞凋亡百分率。 结果:肺系数测定结果显示:肺栓塞组的肺系数明显 高于血清对照组 (P0.01),L一精氨酸组的肺系数与栓塞组 相比明显下降 (P0.05). NO含量测定结果显示:肺栓塞组血浆NO含量明显高 于血清对照组 (P0.05),L-精氨酸组血浆NO含量与栓塞 组相比明显上升 (P0.05). NIIDA含量测定结果显示:肺栓塞组中肺的MDA含量 明显高于血清对照组 (P0.01),L一精氨酸组中肺的MDA含 量与栓塞组相比明显下降 (P0.01)o SOD活性测定结果显示:肺栓塞组中肺的SOD活性明 显低于血清对照组 (P0.01),L一精氨酸组中肺的SOD活性 与栓塞组相比明显上升 (P0.01). ET1浓度测定结果显示:肺栓塞组血浆ET1浓度明 显高于血清对照组 (P0.01),L一精氨酸组血浆ET1浓度 与栓塞组相比明显下降 (P0.05). TXB2含量测定结果显示:肺栓塞组血浆TXB:浓度明 显高于血清对照组 (P0.01),L一精氨酸组血浆TXB:浓度 与栓塞组相比明显下降 (P0.05). 光镜观察肺组织病理变化表明:对照组肺泡无萎陷， 肺动脉血管内无纤维性栓子，肺间质无红细胞漏出。肺栓 塞组肺动脉血管内可见纤维性栓子，小动脉扩张充血明显， 肺泡萎陷，肺间质水肿并可见多量红细胞漏出。L一精氨酸 治疗组小动脉扩张充血不明显，肺泡萎陷减轻，肺间质水 中 文 摘 要 肿减轻，红细胞漏出减少。 用TUNEL法测定肺中细胞凋亡 (细胞个数/高倍视野) 结果显示:血清对照组可见少数凋亡细胞，肺栓塞组中细 胞凋亡发生率明显增加 (P0.01)，给予L一精氨酸后凋亡 细胞显著减少 (P0.01). 用FCM法测定组织凋亡百分率变化结果显示:肺栓 塞后细胞凋亡率明显升高 (P0.01)，给予 L一精氨酸后细 胞凋亡率显著下降 (P0.05). 用免疫组化法测定肺中凋亡因子caspase-3的表达结 果显示:肺栓塞组。aspase-3蛋白表达阳性细胞较血清对 照组明显增高 (P0.01)，给予L-精氨酸后caspase-3蛋 白阳性细胞明显减少 (P0.05). 用Westenblot法测定肺中凋亡因子。aspase-3的表 达结果显示:肺栓塞组caspase-3蛋白表达较血清对照组 明显增高，给予L-精氨酸后