TNF-α和BMP-2诱导人皮肤成纤维细胞表达成骨细胞表型中基因的差异表达.pdf

TNF一Ⅱ和BMP一2诱导人皮肤成纤维细胞表达成骨细胞表型中基因的差异表达 中文摘要 【目的】骨形成是一个复杂的过程，是由细胞募集、增殖、骨分泌和成熟以及矿 化一系列连续发生发展的过程。细胞因子、靶细胞和成骨微环境是骨形成三个重 要条件。皮肤成纤维细胞体外在一定浓度TNF—a和BMP一2联合诱导下能表达成 骨细胞表型，但其中的调控机制不明确。目前对调控机制的研究多局限于某一或 某几个方面，而不能对整个系统有一个前面的了解。基因芯片技术是一个新兴的 技术，具有简便、高效、高通量和能获取大量信息等特点，运用基因芯片技术筛 选联合诱导过程(细胞增殖期、骨基质分泌和成熟期)中差异表达的基因，并对 它们进行分析，筛选出候选基因，进行验证，从而对整个调控机制进行较全面的 研究，进而阐明调控机制。 【方法】采集儿童皮肤标本，分离制备皮肤成纤维细胞，用基础培养液和条件培 养液进行培养。通过检测成骨细胞表型标志碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(oc) 片筛选差异表达的基因，利用GenePro 3000软件分析差异表达的基因，然后使 用Genebank、Unigene等数据库分析基因的功能，筛选出候选基因。 【结果】运用基因芯片筛选，细胞增殖期有193条基因差异表达，其中141条基 因表达下调，52条基因表达上调；骨基质分泌和成熟期差异表达的基因共有491 个，其中235个基因表达上调，256个基因表达下调。它们分别属于(1)原癌基 因和抑癌基因；(2)离子通道和运输蛋白；(3)细胞周期蛋白；(4)细胞骨架和运 录和转录因子；(8)细胞受体；(9)免疫相关蛋白；n0)细胞信号和传递蛋白；qD代 谢；∞蛋白翻译合成；⑩发育相关蛋白；㈣其他 【结论】1．在增殖期(d3)共有193条基因差异表达，其中141条基因表达下调， 可能在皮肤成纤维细胞转化过程起重要作用，调控机制仍需进一步研究。 上调，256个基因表达下调。筛选出差异表达基因数目比在增殖期增加许多，并 且主要是关于代谢、细胞骨架和细胞运动、细胞信号以及与受体有关的基因。这 除了筛选出已报道的成骨细胞表达的基因外，还筛选出未曾报道基因以及目前功 能不明确的基因，需要进一步验证。 关键词：TNF一口、BMP-2、人皮肤成纤维细胞、成骨细胞表型、基因芯片、基因 差异表达、增殖期、骨基质分泌和成熟 2 ofHuman inOsteoblastic GeneDifference Phenotype Expression TNF～QandBMP一2 Fibroblast Skin by Abstract formationisa whichis complicated composed Objective：Bone process of matrix and formation progenitorrecruitment，pr01iferation，bone maturation，and ceilsand mineralization．Cytokines，target osteo