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小jII结肠癌高转移细胞特性研究
中文摘要
背景:结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,在欧美国家,结直肠癌的患发病率
在所有恶性肿瘤中已达到第二位。我国的结直癌的发病率也直线上升,每年大
约有13万新发的结直肠癌病例,我国结直肠癌发病率的增幅是世界平均水平的
两倍,而且发病年龄也从原来的四五十岁向更年轻化的趋势发展,严重威胁人
民的生命健康,从而越来越引起人们的重视。
结直肠癌的主要症状是便血、大便习惯改变和腹部肿块,但这些往往都是进
展期的典型症状。由于结直肠癌早期缺乏特异性的症状和体征,不易引起患者
的重视,从而错失了早期诊断、早期治疗的机会,在出现便血、腹块、肠梗阻
等症状时,往往已属晚期,治疗效果差,患者生存率低,生活质量差。
结直肠癌的另一特点是易发生远处转移,而肝脏是常见的转移器官。结直肠
的大部分血流通过肠系膜血管、门静脉回流入肝,这种特殊的血液回流模式是
结直肠癌最易发生肝转移的原因。有调查显示,约25%的患者在初诊时即有肝
转移,另有25%的患者在治疗中或治疗后出现延迟性肝转移。肝转移给结直肠
癌的治疗带来极大的难度,一旦出现转移,即属晚期,患者往往失去手术根治
性切除的机会,存活期短,生活质量差,因此转移是结直肠癌预后不良的重要
指标之一。对结直肠癌转移的治疗手段十分有限,目前有手术切除、药物化疗、
介入治疗、微波、冷冻等,但总体疗效仍不满意。
众所周知,并不是所有的结直肠肿瘤细胞都会发生转移,是否出现转移及
转移时间的差异,取决于肿瘤细胞的本身的生物学特性。目前,国内外对于肿
瘤转移的基础研究仍十分薄弱,尚未能揭示肿瘤转移的本质。因此,若能在肿
瘤转移的基础研究中有所突破,找出肿瘤转移的内在机制,则有助于探寻治疗
或预防肿瘤转移的对策。
肿瘤细胞因生物学特性的不同,有高转移倾向和低转移倾向之分,因此若
能找到不同转移倾向细胞间的差异,从宏观上讲对研究肿瘤转移机制、探寻预
防或治疗转移的对策有重大的意义,对于患者个体而言,在临床选择治疗方式
及评估其预后有积极的意义。但不同肿瘤细胞之间差异较大,它们之间的比较
l
小jII结肠癌高转移细胞特性碍霓
意义较小。若能在同种细胞中筛选出不同转移倾向的肿瘤细胞,比较它们之间
的差异,则更有意义,更有助于解释肿瘤转移的本质。
本实验通过运用建立高转移动物模型的方法筛选出的高转移性C26细胞,
与未筛选的C26细胞进行比较,找出两者之间的差异,从而为探讨结肠癌转移
的生物学机制和抗转移治疗提供较好的理论依据。
方法:高转移动物模型的建立和高转移性C26细胞的筛选:取原代免疫缺陷
NOD.SCID小鼠,C26瘤组织皮下移植,待荷瘤小鼠濒死时,切取肺转移灶移
它每代4只NOD.SCID小鼠。按上述方法筛选5代后,取肺转移灶移植到免疫
系统正常的BALB/e小鼠皮下,继续按上述方法在BALB/c小鼠体内筛选,按
此法获得高转移小鼠结肠癌模型。切取瘤组织,再以原代培养的方法获得小鼠
结肠癌高转移细胞。
高转移性C26细胞和未筛选C26细胞的比较:进行未筛选C26细胞与高转
移C26细胞的病理组织学、电镜超微结构、细胞增殖周期和异倍体的观察以及
细胞生长曲线和体外侵袭试验比较。
1
所得实验数据用统计软件SPSS1.5进行统计分析。
结果:成功地建立了高转移性C26动物模型,通过高转移性动物模型成功地筛
选出了高转移性C26细胞。
高转移性C26细胞与未筛选C26细胞的比较:病理组织学结果提示在形态
学上高转移C26细胞与未筛选C26细胞无显著差异;电镜超微结构观察,在细
胞核的形态上,两者有差异;细胞增殖周期和异倍体观察,提示C26高转移细
胞G2.M期和S期明显高于未筛选C26肿瘤细胞:细胞生长曲线提示高转移C26
细胞的生长速度快于未筛选C26细胞;体外侵袭试验表明高转移C26细胞穿过
人工基底膜的细胞数明显多于未筛选C26细胞,有统计学差异(P0.001)。这
些结果均提示高转移性C26细胞的恶性程度要高于原未筛选C26细胞。
小鼠结肠癌高转移细胞特性碍究
结论:成功地建立了高转移C26小鼠结肠癌模型,获取了高转移C26细胞。在
细胞形态学方面,普通C2
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