耐糖皮质激素人淋巴瘤细胞系Toledo%2fDEX的建立及其生物学特性的研究.pdfVIP

中文摘要 耐糖皮质激素人淋巴瘤细胞系Toledo／DEX的建立及其 生物学特性研究 B 目的 建立人弥漫大B细胞淋巴瘤(di航se larlyc 及耐药机制进行初步研究。 方法 递增法诱导耐药细胞系。将对数期T01edo细胞接种于培养瓶，置于含DEx 起始浓度为1×10。8M的培养液中培养96小时后，改为不含药物的培养液培养， 待细胞增殖再次进入对数生长期，提高DEx浓度1倍，直至在含DEx 1．024×10巧M的浓度中稳定生长。用CCK-8法检测不同暴露时间及不同浓度 的DEX对耐药细胞及亲本细胞增殖抑制作用的差异，同时检测耐药细胞及亲 本细胞对DEX的药物敏感性，计算耐药指数。将耐药细胞脱离DEX作用后 检测其耐药稳定性。 观察耐药细胞系和亲本细胞系的生物学特性。通过光学显微镜观察细胞 一般形态学变化，透射电子显微镜观察细胞超微结构变化；CCK．8法测定倍 增时间及耐药指数，绘制生长曲线；利用流式细胞仪检测细胞免疫表型；采 用常规细胞遗传学方法，R显带后进行核型分析；利用流式细胞仪检测细胞 周期比例，了解细胞周期分布。观察两种细胞在裸鼠成瘤性的差异。westenl blot方法检测GR彬B蛋白表达的变化。 结果历经6月的培养，建立了耐药细胞系T01edo／DEX，并对耐药细胞进行 生物学特性观察。形态上，耐药细胞与亲本细胞相似，悬浮生长，细胞大小 不均一，呈圆形或椭圆形，体积较正常的淋巴细胞大，胞浆少，细胞核大， 占据大部分细胞体积，且大小不一。经瑞氏染色在光学显微镜下观察，可见 两种细胞形态无明显差异，油镜下形态与Burkitt淋巴瘤细胞形态相似，细胞 胞体偏大，形态不规则，核／浆比例增高，胞浆淡蓝色，浆内见空泡。核不规 则，可见多个核仁及核裂。透射电镜观察，耐药细胞Toledo／DEX超微结构 与Toledo大体一致，不同点是其局部可见片层状突起，有细长微绒毛。流式 细胞仪分析细胞免疫表型示两种细胞完全一致，均为CD2。、CD3‘、CD5’、CD7’、 体核型分析示耐药细胞除亲本细胞的染色体变异外，还存在l、4、7、lO号 染色体异常，但均未形成两个相关的克隆。细胞生长曲线示耐药细胞细胞增 殖速度比亲本细胞缓慢。PI检测细胞周期分布发现耐药细胞G1期细胞增多， 而S期和G2期细胞减少。两种细胞裸鼠成瘤率为0％。耐药谱分析示耐药细 胞相对于亲本细胞，对地塞米松、阿霉素(枷amycin，ADM)、环磷酰胺 统计学意义。W．estem 耐药倍数的增高而下降。同时耐药细胞GRp表达上调，且随着耐药倍数的增 高而明显上升。 结论采用长期间歇小剂量DEx递增诱导法，成功建立了糖皮质激素耐药指 数为1227倍的T01edo／DEx细胞系。该诱导耐药的方法可行性强，诱导时间 耐药的机制之一。 关键词弥漫性大B细胞淋巴瘤，糖皮质激素，地塞米松，生物学特性，耐 药性，机制 2 Abstract EstabIishmentOf human lymphoma glucocorticoid-resistant line andIts characteristics cell 1’oledo／DEXbiological thls areto human ectiVeTheaimsof establishthe obj study di觚se B cell1ine glucocorticoid-resistantla玛e l蛐phom