CH5-2固定化酶的性质.pptVIP

CH5-2 固定化酶的性质1. 固定化处理对酶性质的影响 从溶液酶的游离状态，到固定化酶的“局限”状态，是一个很大的转变。不仅酶分子本身，而且酶反应的环境也有所不同。因而，固定化酶的性质与溶液酶大相径庭 固定化酶的制备方法很多，酶在固定化过程中，对酶反应系统产生的影响各不相同。我们假定酶固定化之后，在载体表面或多孔介质内的分布完全均匀，我们不考虑固定化处理过程中，技术操作的问题，我们可以将固定化带来影响概括为如下三个方面： CH5-2 固定化酶的性质2. 固定化的酶性质 ⑴ 分配效应对Km的影响 这种影响通常用分配系数(ρ)来描述： ρ＝[Si]／[S] (1) 式中[Si]和[S]分别表示底物或其它效应物在微环境中的局部浓度和宏观体系中的总体(或平均)浓度。 CH5-2 固定化酶的性质2. 固定化的酶性质 ⑵ 扩散限制效应 酶固定化之后，由于扩散限制，使得酶往往不能得到宏观体系相同水平的底物，因而观测到的实效反应速度，常低于理论预测的水平。对于这种影响，通常引用实效系数ηO进行定量讨论。 v=ηOvp ηO = v /vp （1） ? 式中v为实效反应速度，vp为理论预期反应速度，即由溶液酶的米—孟氏方程确定的速度。 Vmax[S] Vmax[S] 由 v= ＝ηO （2） Km+[S] Km+[S] CH5-2 固定化酶的性质3. 固定化的酶催化条件 ⑴ 酶活力回收率 游离酶经过固定化以后，酶活力往往下降。固定化酶所保留下来的酶活力与游离酶在固定化之前的酶活力之比，称为该酶活力回收率，也叫固定化效率、残存活力等。在不考虑扩散限制影响的情况下，固定化酶的酶活力回收率可以通过实验测得 由下式求得： ? V’m .Bim Fim ％ ＝ × 100% Vm .B 式中Fim为活力回收率(％)，B为固定化前所用的游离酶溶液体积；Bim为制得的固定化酶湿体积；Vm 为固定化前的酶的最大反应速度；V’m 固定化酶测得的表观最大反应速度。 CH5-2 固定化酶的性质3. 固定化的酶催化条件 ⑸ 米氏常数变化 酶被固定化后，米氏常数的变化前已推导，下表所列固定化酶的K’m值与游离酶的Km值之比值： CH5-2 固定化酶的性质3. 固定化的酶催化条件 ⑹ 最大反应速度的变化 固定化酶的最大反应速度(V’m)与游离酶的Vm值大多基本相同， 事实上，对于最大反应速度的比较是很难进行的，因为Vm与反应体系中的加酶量有关，单纯Vm的比较，也难以说明什么问题，最客观的比较参数应该是Kcat 但到目前笔者尚未收到有关研究资料报道。 CH5-2 固定化酶的性质4. 固定化酶的稳定性 ⑴ 固定化酶的热稳定性 大多数酶经固定化以后，热稳定性提高。 例如，乳酸脱氢酶、脲酶、氨基酰化酶、胰蛋白酶等，固定化后，热稳定性都比游离酶高； 也有固定化之后耐热性反而下降的例子。 DEAE—纤维素离子交换吸附的转化酶，40℃加热30分钟，其剩余活力为4％，而游离酶，在相同条件下其活力为100％。 CH5-2 固定化酶的性质5. 固定化酶稳定性的途径 探讨固定化过程增强酶稳定性的机制，从中寻求提高固定化酶稳定性途径，是值得重视的课题，不少研究者已在这方面作了有益探索。初步归纳有以下几点。 CH5-3固定化酶反应器1.固定化酶反应器类型 酶反应器是以酶作为催化剂进行反应所需的设备。性能优良的反应器，可大大提高生产效率。 酶反应器的形式很多，根据进料和出料方式，可概括为两种类型： 分批搅拌式反应器(BR)与连续流式反应器(CFR)。 后者又有两种基本形式：连续流搅拌桶(罐)反应器(CST)、复合搅拌反应器（CSR）、填充床反应器(PR) 和流化床反应器（FBR）。 CH5-3固定化酶反应器 1.固定化酶反应器类型 CH5-3固定化酶反应器 1.固定化酶反应器类型 ⑴ 分批搅拌反应器 这类反应器结构简单，不需特殊装置，适于小规模试验。目前我国酶反应器主要用这种形式的反应器。用溶液酶或粗酶制剂催化时，酶一般不回收，待反应转化为一定程度后，直接加热或用其它方法使酶失效除去。这种反应器在工业生产中，很少采用固定化酶，因为在反复过滤或离心回收过程中，容易造成酶失效损失。 CH5-3固定化酶反应器2.固定化酶反应器的选择 酶反应器的选择主要考虑以下几个方面的问题： ①