骨桥蛋白在创面愈合中的作用和意义.pdfVIP

中文摘要 骨桥蛋白在创面愈合中的作用和意义 摘 要 目的：损伤修复是一个非常复杂的过程。尽管因损伤 的部位、程度和性质不同，修复过程具有一定的差异。但 各种损伤的修复过程具有共同规律，都可以分为炎症期、 增生期和重建期。在炎症期，白细胞、红细胞、血小板外 渗到损伤部位，释放一系列的细胞因子、炎症介质；在增 生期，出现上皮细胞增生、移行，血管和纤维组织形成等 一系列组织形态学变化；重建期是各种细胞外基质蛋白沉 积及重新分布与调整过程。近年，本实验室在研究血管内 皮损伤后内膜增生的调节过程中发现，骨桥蛋白 (osteopotin，OPN)是血管内皮损伤早期平滑肌细胞大量释 放的细胞外基质功能蛋白，参与介导细胞迁移、粘附和募 集血液单核细胞。由此推测。oPN可能具有炎性介质的作 用。本研究以大鼠开放性创口为模型，试图探讨OPN在 创面愈合中的作用和意义，为筛选促进伤口愈合的外用药 物提供实验依据和理论基础。 方法： 1．实验动物：SD雄性大鼠18只，体重3009，大鼠被 随机分为外用OPN、大鼠血清及EGF三组。麻醉后，在 背部切除直径为4cm的圆形全层皮肤组织，大鼠背部伤口 分别涂布OPN、大鼠血清及EGF后外敷凡士林纱布包扎。 术后每天换药1次，分别于术后第4及第7天处死动物， 立即取下所有创面全层皮肤组织。常规切片，HE染色， ．． ±查塑墨 一 ———————-__———————__-__———’——_●_____-——————●-_————一 光镜下观察细胞增殖、肉芽组织生长、炎细胞浸润、血管 生长和分布以及上皮再生等情况。 2．免疫组化染色： 用1：200稀释的I型胶原抗体， 检测肉芽组织中的I型胶原含量与分布。以细胞间质出现 棕黄色颗粒者为阳性。 3．I型胶原Westernblot分析：取创面肉芽组织，制 成组织匀浆。进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，电转移至 硝酸纤维素膜上。将印迹膜置于封闭液中，随后与一抗(兔 抗大鼠I型胶原多克隆抗体)及二抗反应，显色液显色。 4．羟脯氨酸含量测定：将伤口肉芽组织经丙酮一乙醚 (1：1)脱脂、干燥后，于110℃盐酸水解24小时，调pH值 至6．0，调整体积至10mL，取上清液，用氯胺T氧化法检 测羟脯氨酸含量。 结果： 1．形态学改变；各组大鼠在创伤和用药处理后精神 状态等一般情况良好，无明显感染现象。术后第1天，血 清组和EGF组创面相对较为干燥，OPN组创面可见有少 量的渗出物。术后第2～3天，各组均可观察到肉芽组织 生长，创口边缘薄的上皮开始向创面内延伸，其中OPN组 虽有肉芽组织增生，但没有充满伤口底层；而血清组、EGF 组肉芽组织增生明显。术后第4～7天，血清组、EGF组可 见肉芽组织逐渐成熟，其中成纤维细胞和新生毛细血管含 量丰富，胶原纤维增多。OPN组肉芽组织层明显较血清 组、EGF组薄，新生毛细血管数量亦较少，个别部位肉芽 水肿明显。 2．I型胶原的含量，在术后第7天，各组动物肉芽组 中文摘要 织中，I型胶原阳性颗粒呈囊状分布于成纤维细胞及毛细 血管周围的基质中。三组动物相比，OPN组阳性染色颗 blot区带进行定 粒明显少于血清组、EGF组。对Western 量分析的结果表明，术后4天，EGF组肉芽组织中I型胶 原含量最高，为OPN组的1．5倍，血清组含量略少于EGF 组，OPN组最低．术后7天，EGF组肉芽组织中I型胶原 含量最高，为血清组的1．2倍，为OPN组的1．3倍。I型 胶原的Western blot结果与免疫组化基本一致，说明OPN 对I型胶原合成影响不大或有抑制作用。 3．羟脯氨酸含量：术后第4天和第7天，各实验组肉 芽组织中羟脯氨酸含量无显著性差异(PO．05)。 结论： 1．OPN是一种促炎因子，具有诱导创伤早期炎症反应 的作用。 2．OPN有减缓肉芽增生的功能。 关键词；骨桥蛋白，伤El愈合，大鼠。 荚文摘要