叶锈菌与小麦互作过程中_1_3_葡聚糖酶基因的表达分析_高琳.docVIP

第 ３７ 卷 第 ３ 期 ２　　　 年 ５ 月 　  河 北 农 业 大 学 学 报 ＪＯＵＲＮＡＬ　 Ｆ　 ＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ　 ＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　 Ｆ　 ＥＢＥＩ  Ｖｏｌ．７Ｎｏ． Ｍａｙ．２　　　 　  文章编号 ：１０００－１５７３（０１４）３－０００７－０６　  ＤＯＩ：１０．３３２０ｊ．ｎｋｉ．ａｕｈ．０１４．０５５  叶锈菌与小麦互作过程中β－１，－ 葡聚糖酶 基因的表达分析 高　琳，　栗小英，　张艳俊，　王海燕，　刘大群 （河 北 农 业 大 学 植 物 保 护 学 院／河 北 省 农 作 物 植 物 病 虫 害 生 物 防 治 工 程 技 术 研 究 中 心／ 国 家 北 方 山 区 农 业 工 程 技 术 研 究 中 心 ，河 北 保 定 ０７１００１） 摘要 ：β－１，－葡 聚 糖 酶 是 一 类 以 基 因 家 族 形 式 存 在 的 重 要 病 程 相 关 蛋 白 （ａｔｈｏｇｅｎｅｓｓ－ｒｅａｔｅｄ　ｒｏｔｅｎｓ，ＰＲ），即 ＰＲ２。 本 研 究 采 用 ＲＴ－ＰＣＲ 方 法 在 小 麦 抗 叶 锈 病 近 等 基 因 系 材 料 ＴｃＬｒ１９ 中 获 得 １１ 个 ＰＲ２ 基 因 ，暂 命 名 为 ＴｃＬｒ９ＰＲ２１～１１，其 中 具 有 完 整 开 放 阅 读 框 Ｏｐｅｎ　ｅａｄｉｎｇ ｒａｍｅ，ＯＲＦ）的 基 因 包 含 １００５ｂｐ，编 码 ３３４ 个 氨 基 酸 残 基 。Ｂｌｓｔ分 析 显 示 ＴｃＬｒ９ＰＲ２ 属 于 糖 基 水 解 酶 第 １７ 家 族 ＧＨＦ１７），且 均 为 碱 性 蛋 白 。 半 定 量 ＲＴ－ ＰＣＲ 分 析 表 明 ，该 基 因 表 达 明 显 受 小 麦 叶 锈 菌 诱 导 ，在 非 亲 和 组 合 中 表 达 量 高 于 亲 和 组 合 ，同 时 明 确 其 表 达 受 脱 落 酸 Ａｂｓｃｓｃａｉ ，ＡＢＡ）和 水 杨 酸 （ａｌｃｙｌｃａｉ ，ＳＡ）逆 境 信 号 分 子 的 诱 导 。 本 研 究 构 建 了 ＴｃＬｒ９ＰＲ２ 基 因 的 原 核 表 达 载 ｐＥＡＳＹ－ＰＲ２，在 大 肠 杆 菌 中 高 效 表 达 分 子 量 约 为 ３０ｋＤａ的 融 合 蛋 白 ，最 佳 诱 导 条 件 为 ：８ ， ０． ｍｍｏｌＬ　ＰＴＧ。 说 明 ＴｃＬｒ９ＰＲ２ 基 因 可 能 在 小 麦 抗 叶 锈 病 防 御 反 应 中 发 挥 作 用 。 为 明 确 ＰＲ２ 基 因 在 叶 锈 菌 与 ＴｃＬｒ１９ 小 麦 互 作 体 系 中 的 功 能 奠 定 了 基 础 ，为 培 育 抗 叶 锈 病 小 麦 品 种 提 供 了 理 论 和 实 践 基 础 。 关 　键 　词 ：小 麦 ；叶 锈 菌 ；病 程 相 关 蛋 白 ；表 达 分 析 ；原 核 表 达 中图分类号 ：Ｓ４３５．２１． ＋３ 文献标志码 ：Ａ  Ｅｘｐｒｅｓｓｏｎ　ｎａｌｙｓｓｏ β －１， ｇｌｕｃａｎａｓｅｓ ｅｎｅ ｒｏｍ　ｈｅａｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏ　ｕｃｃｎｉａ　ｒｔｃｎａ ＧＡＯ　ｉ ，ＬＩ ｉａｏｙｉｇ，ＺＨＡＮＧ　ａｎｊｎ，ＷＡＮＧ　ａｉｙａｎ，ＬＩＵ　ａｑｕｎ Ｃｏｌｅｇｅ　ｆ　ｌｎｔ　ｒｏｔｅｃｔｏｎ，Ａｇｒｃｕｌｕｒａｌ　ｎｉｖｅｒｓｔｙ　ｆ　ｅｂｅ／ Ｂｉｏｌｏｇｉａｌ　ｏｎｔｒｏｌ　ｅｎｔｅｒｏ　ｌｎｔ　ｉｅａｓｅｓａｎｄ　ｌｎｔ　ｅｓｔｓ　ｆ　ｅｂｅ　ｒｏｖｉｎｃｅ Ｎａｔｏｎａｌ　ｎｇｉｎｅｅｒｎｇ　ｅｓｅａｒｃｈ　ｅｎｔｅｒｆｏｒ　ｇｒｃｕｌｕｒｅｉｎ　ｏｒｔｈｅｒｎ　 ｏｕｎｔａｎｏｕｓ　ｒｅａｓ，Ｂａｏｄｉｎｇ　７１０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｒａｃｔ： －１，３－ｇｌｕｃａｎａｓｅｉ　　ｅｎｅ ａｍｉｙ　ｈｉｈｉ　ｎｅ　ｆｔｈｅ　ｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｓ－ｒｅ－ ｌａｔｅｄ　ｒｏｔｅｎｓ （ Ｒ）ａｎｄｂｅｌｏｎｇｓｔｏＰＲ２ ｇｅｎｅｓｎａｍｅｄＴｃＬｒ９ＰＲ２１－１１　ｗｈｉｈｈａｄｈｉｇｈｈｏ－ ｍｏｌｏｇｙ　ｉｈ　ａｔｈｏｇｅｎｅｓｓ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｒｏｔｅｎ　 　ｗｅｒｅｏｂｔａｎｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲｆｒｏｍｃＤＮＡ ｏｆＴｃＬｒ１９ ｗｈｅａｔ．Ｓｏｍｅｏｆｔｈｅｍ ｃｏｎｔａｎｃｏｍｐｌｅｔｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｏｆ１００５ｂｐｅｎｃｏｄｉｎｇ３３４ａｍｉｎｏ ａｃｄｓ．Ｂｌａｓｔａｎａｌｙｓｓｓｈｏｗｅｄ ｈａｔｔｈｅ　ｕｔａｔｖｅ　ｒｏｔｅｎ　ｏｄｅｄ　ｙ　ｃＬｒ９ＰＲ２　ｅｎｅ　ｅｒｅ ｌａｓｓｆｅｄ ｉｎｔｏｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｓ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｎ　２ｆａｍｉｙ　ｗｉｈ　ａ　ｇｌｙｃｏｓｙｌｈｙｄｒｏｌａｓｅｆａｍｉｙ　１７ ｃ