激光捕获显微分离技术在法医学中DNA检验方法的研究.docVIP

激光捕获显微分离技术在法医学中DNA检验方法的研究 吴微微，苏艳佳，郝宏蕾，任文彦 （浙江省公安厅刑侦总队，浙江 杭州310009） [摘要] 目的 建立一套显微细胞捕获技术在法医学生物检材中的DNA检验方法。方法 使用Veritas? LCM激光捕获仪，采用紫外加红外的捕获方式，对框架覆膜玻片上经苏木素染色口腔上皮细胞进行捕获，采用改良硅珠法提取细胞DNA，使用IdentifilerTM试剂盒在5μl体系中进行PCR扩增。结果 成功获得20个口腔上皮细胞的13个以上完整STR基因座分型谱带。结论 本研究建立的方法适合法医学生物检材制成的染色涂片上细胞的DNA检验。 [关键词] 法医物证学；激光捕获显微分离；染色细胞涂片；STR分型 A study of DNA testing methods about Laser Capture Microdissection in forensic science application /（△WU Weiwei，HAO Honglei，JIN zhou，et al./ △Department of Criminal Investigation，Zhejiang provincial public security bureau，Hangzhou 310009,China） [Abstract] Objective To established a method of DNA testing methods about Laser Capture Microdissection in forensic science application. Methods The oral epithelial cells on the frame member slide stained with haematoxylin, which were Captured by laser and infrared Using Veritas? LCM system , the DNA was extracted by improved silicon methods, then was amplified in 5μl volume with IdentifilerTM kits. Results Above 13 STR loci genotype were obtained from 20 oral epithelia. Conclusion The methods established in this paper were suitable for the stained slides of biological samples in forensic science. [Key words] Forensic science evidence; Laser Capture Microdissection（LCM）；stained smears ；STR genotyping 激光捕获显微分离技术已广泛应用于肿瘤学、发育生物学、神经生物学、植物学中[1,2]，近几年来逐渐受到法庭科学工作者的重视与应用，因其在显微镜直视下捕获目标细胞，可以有效解决DNA分析技术在法庭科学应用实践中遇到一些难题，可以从混合样本中分离出单种类细胞，如精斑混合斑中含有大量女性阴道上皮细胞而仅含微量精子的，无法采用常规两步分离法获得精子DNA分型的，而LCM技术可以直接选取其中的精子细胞而不受女性物质的干扰；或利用LCM技术从混有母体细胞的流产组织中分离绒毛；此外，法医物证中经常遇见载体含有严重扩增抑制因素的检材，难以成功检验，利用LCM技术可从中分离出目标细胞，有效排除载体的干扰等[3-6]。本研究针对染色涂片中的口腔上皮细胞，建立了一套激光捕获显微分离与下游DNA检验的方法，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 样本 采用志愿者口腔上皮细胞作为实验样本。 1.1.2 主要仪器设备与试剂 Veritas? LCC1704型激光捕获仪（美国Arcturus公司），框架覆膜玻片（美国Arcturus公司）；Macro或HS收集盖（美国Arcturus公司）；苏木素染色液（丹麦Dako公司），IdentifilerTM试剂盒（美国ABI公司）；9700型扩增仪（美国ABI公司）；3130XL型基因分析仪（美国ABI公司），优级纯二甲苯；分析纯无水乙醇等。 1.2 实验方法 1.2.1 染色细胞涂片的制作 剪取适量载体，用无菌去离子水浸泡，置37℃保温0.5-1小时；套管低速3000rpm离心5min后去载体，留液体100-200μl；吸取细胞悬浮液1-2滴至框