转HvNHX1基因枸杞植株的获得及耐盐性分析.pdfVIP

摘要 土壤盐渍化严重影响植物的生长和发育，制约着当今农业生产的发展，提高作物的耐盐性己 成为一个日益紧迫的研究课题。随着分子生物学的深入研究，发现液泡膜Ne?／n+离子逆向转运蛋 白将Na+区隔化在液泡，是植物抵御盐胁迫的主要方式之一，在植物耐盐方面起着非常重要的作 用。目前国内外已有利用液泡膜Na+／H+离子逆向转运蛋白基因转化农作物，并获得的耐盐能力相 对提高的转基因植株的文献报道。本研究利用基因工程手段将HvNHXl基因导入宁夏重要的经济 作物枸杞中，提高枸杞耐盐能力，为提高枸杞产量、盐碱的改良和扩大利用提供了很好的途径。 以枸杞叶片为外植体，优化出一套完整、高效的枸杞叶片再生体系。最佳的愈伤组织、不定 mg／L +NAA0．2mg／L+蔗糖15∥L+琼脂79／L； 化，确定了最终的转化条件：抑菌剂替卡西林的较适浓度为200．300mg／L，卡那霉素较适浓度为 50mg／L。农杆菌侵染浓度在OD0．4．0．6之间、侵染6min、共培养3d的转化效果最好。 对侵染叶片进行再生培养，最终筛选出24株卡那霉素抗性枸杞，对其进行PCR检测，有9 株显示阳性，转化率为38％。后对长势健康的6株阳性苗进行RT．PCR检测，结果表明HvNHXl 已经成功整合到枸杞基因组中，并在RNA水平上得到表达。 灌10d后测定转基因枸杞和非转基因枸杞的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(PoD)、丙 二醛(MDA)、叶片Na原子含量等生理指标的变化，结果表明：盐胁迫处理后，转基因植株的 SOD、POD活性均比对照高，且同一转基因植株在不同盐浓度下SOD、POD活性变化幅度较对 照小，说明转基因植株对盐胁迫的耐受能力较强，受到的活性氧伤害较小。同浓度下，转基因植 株的MDA含量要比非转基因植株少，表明转基因植株的受到的膜脂过氧化作用较弱，因此产生 了比对照少的MDA。叶片Na原子含量测定结果表明：盐胁迫下转基因植株的Na原子含量随着 盐浓度的增大而增加，非转基因枸杞的Na原子含量变化不大，说明由于外源基因的导入，使多 余的Na+被区隔化在液泡中，从而减轻了盐离子对植株的伤害，一定程度上提高了植株的耐盐能 力。 综合分析得出：在盐胁迫下，转基因枸杞表现出较好的耐盐特性，初步证明HvNHXl基因的 导入对枸杞的耐盐性有所提高。 关键词：枸杞，HvNHXl基因，耐盐性 Abs仃act Soilsalinizationaffects and restrictsthe of seriouslyplantgrowthdevelopment，and development has become toenhancetosalt-tolerancein agriculturalproduction，it increasinglyurgent agricultural ofmolecularin isdiscoveredthatNgis crops。W珧furtherunderstandingbiology cells，it plant from intovacuole locatedon vacuolarmembrane．whichis transportedcytosol byN舢+antiporter oneofthemost cells saltstress。At importantways