仙台病毒载体的研究与应用进展.pdfVIP

仙台病毒载体的研究与应用进展 付志浩 饶春明 李永红 高凯 王军志* （中国食品药品检定研究院北京 100050 ） 仙台病毒（Sendai virus SeV ），又称乙型副流感病毒Ⅰ型，日本凝血病毒 （hemagglutinating virus of Japan, HVJ ），是单负链的的RNA病毒，属副粘病毒科， 呼吸道病毒属。早在上世纪 80 年代，人们已经发现仙台病毒具有包膜融合作用 并将其用于细胞融合实验及脂质体混合转染[1,2] 。随着反相遗传学技术的发展， 仙台病毒被开发为胞质表达传播缺陷型的病毒载体，临床前研究已证实其携带外 源基因对某些疾病，如呼吸道疾病，缺血性损伤，肿瘤的治疗作用。另外，仙台 病毒载体已成为活载体疫苗的候选载体用于新型疫苗的研究，其作为病毒载体的 [3] 优势主要在于 ：Ⅰ迅速感染细胞，摄取时间短，Ⅱ感染不受细胞周期的影响， Ⅲ表达外源基因高效且可调控，Ⅳ生活周期完全在胞质中进行，无DNA相，无 整合风险，安全性高，Ⅴ单负链RNA基因组且不分节段，重组几率大大降低， Ⅵ可高效在各种组织中表达，应用范围广。目前，仙台病毒载体被定义为高效的 基因转导工具。本文从仙台病毒的基因组分子结构，致病性，载体的构建和类型 以及其应用等方面进行详细论述。 1. 仙台病毒的结构和生活周期 仙台病毒形态不规则，平均直径为 150-200nm，其单负链基因组由 15384 个 核苷酸构成，与核蛋白NP （58KD ）紧密结合。很多负链RNA病毒基因组核苷酸 总数为 6 的倍数，如麻疹病毒(measles virus, MV)，新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV) ，而仙台病毒也不例外，称之为“6 碱基原则”，这可能是由于每个NP 蛋白单体与 6 个核苷酸相互作用[4,5] 。只有遵循这一原则，病毒才能有效的转录， 复制和包装，因此在插入外源基因构建cDNA克隆时应考虑这一点。病毒核衣壳 还包括磷酸化蛋白P(65KD)和聚合酶大亚基L （251KD ），与基因组RNA 、NP共 同构成RNP复合体，即为病毒的核心，RNP复合体形式可以保护基因组RNA免受 RNA酶的作用。与正链RNA病毒可以直接以基因组作为模板翻译不同，仙台病 毒需要自身携带聚合酶进入宿主细胞，NP ，P ，L三种蛋白协同作用，成为依赖 RNA 的RNA聚合酶[6],其中NP起主导作用，是病毒核衣壳的结构单位， *通讯作者：王军志 (010，E-mail: wangjz@nicpbp.org.cn 调节聚合酶由转录向复制模式的转变，L和P是辅助的核衣壳蛋白，执行转录和 复制任务，包括起始、延伸、终止以及mRNA 的多A化，甲基化，带帽[7]等。 在病毒颗粒中，核衣壳由脂质双层的包膜包裹，血凝素神经氨酸酶HN和融 合蛋白F借助疏水区锚定于包膜上，并与位于包膜内侧的M蛋白（基质蛋白，matrix protein ）相互作用( 图 1)[3] 。包膜蛋白HN和F决定病毒的组织趋向性。HN蛋白一 方面可以与普遍表达于哺乳动物细胞表面的唾液酸分子结合，另一方面其酶切作 用可防止病毒自身聚集； HN蛋白介导病毒与细胞吸附使其紧密结合，而F蛋白 则介导包膜融合，以释放病毒RNP复合体进入细胞。初合成的F蛋白为无活性的 F 形式，由二硫键连接的两个亚单位构成，病毒表面的F 被一种类胰酶的内源蛋 0 0 白酶切割为F 和F ，病毒才能获得感染力，正是由于啮齿类动物呼吸道Clara细胞 1 2 [8] 能分泌此类蛋白酶，仙台病毒主要感染啮齿类动物呼吸道 。仙台病毒的体外细 [9] 胞培养也需要加入胰酶以诱导F 酶切以产生活性形式的病毒 。 0 RNP复合体进入细胞后，聚合酶以基因组RNA为模板转录并翻译出病毒结构 蛋白