辣椒疫霉菌（Phytophthoracapsici）实时荧光定量检测方法的.pdfVIP

20 12. 5 作物杂志 Crops 辣椒疫霉菌(Phytop hthora cap sici)实时 荧光定量检测方法的研究 1 1 ，2 1 ，2 3 2 2 2 王淑芳 马桂珍 暴增海 李世东 陈 月 钱媛媛 尹 璐 1 2 ( ，222005 ， ; ，222005 ， 江苏省海洋生物技术重点建设实验室 江苏连云港 淮海工学院海洋学院 3 ，100081 ， ) 江苏连云港;中国农业科学研究院植物保护研究所 北京 ， 摘 要 为建立快速准确的检测土壤 中辣椒疫 究主要依靠病原菌的分离培养 不仅耗时长且难以 ( Phytop hthora cap sici Leonian) ， 。 霉菌 的 实时 荧光定量 准确定量 不能给病害防治提供有效防治时期 因 ， ITS ， 、 、 ， 体 系的方法 根据辣椒疫霉菌保守 的 序列设 计 此 探索一种快速 准确 定量病原菌检测技术 对于 PCR ， 。 的特异性 荧光 实时定量 的引物 通过对保守序 病害的诊断防治具有重要意义 本研究构建的实时 ， ， 、 列构建克隆文库 筛选 阳性克隆子 制备 用于实时荧 荧光定量检测方法可以快速 准确地定量带菌土壤 ， 。 ， 。 光定量体 系的标 准品 从 而构 建优 良的标 准曲线 中辣椒疫霉菌的数量 对控制病害蔓延有重要意义 利用构建的标准曲线和优化的实时荧光定量体 系对 ， ， 同时 随着生防菌的分离和抑菌机制研究的深入 生 人工接种含梯度浓度的辣椒疫霉菌 的土壤样品进行 防菌与病原菌的微生态学研究越来越受到广大研究 实时荧光定量 PCR 检测 。辣椒疫霉菌荧 光 实时定 。 者的重视 本方法的构建可对研究辣椒疫霉与生防 2 量 PCR 检测 体 系的标 准曲线 的相 关 系数为 R = 菌的互作及其生态学影响提供理论依据。 0. 980 ， － 3. 295 ， 10 1. 1% ， 斜 率 为 扩 增 效率 为 线性 Y = － 3. 295X + 44. 484 ， 1 材料与方法 方程为 标 准品的检测 下 限 为 1. 000 × 102 ，