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创 用2-D差异凝胶电泳的方法对宿主细胞蛋白模式
新 进行特征描述可提高对过程的认识
论 A. Hagner McWhirter, S. Grimsby, A. Jorsback, T. Bj ?rkman, L. Kask, L. Bj ?rkesten, and G. Malmquist
坛 GE Healthcare, Uppsala, Sweden
2-D差异凝胶电泳被用来研究不同的培养条件对表达 MAb效价通过HiTrap MabSelect SuRe 1 ml柱亲和层析
。 ， 。 ，
单克隆抗体的细胞的影响 和抗体识别不同 这种描述是 得以确定 少量分装的样品在中性PH条件下加载层析柱
以单个宿主细胞蛋白( HC P)表型和HC P模式为主。2- D差异 在PH 3时对结合的物质进行洗脱。280 nm处吸光度测定的
凝胶电泳分析是一种高灵敏感的方法，用于检测独立的低 洗脱峰面积与标准曲线进行比较。HCP水平通过ELISA进行
丰度蛋白和需要高分辨率检测的蛋白质亚型。蛋白丰度的 测定。
差异可通过高的统计学置信度进行分析。我们在模型研究 亲和纯化
中显示通过标准化内标准物有可能将上下游分析定量地联 收集得 到 的细胞培 养上 清 中的M A b 通 过 H i T r a p
系在一起。当单克隆抗体被亲和纯化后可检测到低水平的 MabSelect SuRe进行纯化。以负荷密度为20 g MAb/l 介质
HCP残留出现明显的差异。这种蛋白组学方法可增加对过 (树脂) ，将样品上样到PBS中，pH 7.4 。pH 3.5的60 mM柠
， 。 檬酸钠进行洗脱。洗脱pH值通过磷酸钠进行中和。收获
程的了解 促进工艺优化以及质量源于设计
T M
，
液 流穿成分和洗脱成分分别加载在VivaSpin 样品浓缩器
介绍 (MWCO 5000)中用以将缓冲液交换成DIGE标记缓冲液(2-D
T M
蛋白提取缓冲液V+30 mM的Tris 缓冲液)。
生物制药学如单克隆抗体(MAbs)通常都是从基因改造
2-D DIGE分析
的哺乳动物细胞系产生。法规部门需要确保产品质量并使
HC P水平通过ELISA 进行分析 ，而HC P模式的变化则
病人使用时安全性足够高。这种要求以及整个过程的理解
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