携带 IL-2和 NK4双基因真核共表达载体的减毒沙门菌株的构建.pdfVIP

· 28 · 解放军医药杂志 2014年7月第 26卷 第 7期 Med＆PharmJChinPLA，Vo1．26，No．7，Ju1．2014 · 论著 · 携带 IL一2和 NK4双基因真核共表达载体的 减毒沙门菌株的构建 张尚弟 ，哈小琴 ，杨志华，李 兵 ，邓芝云，姜东红 ，张 俊 ，王剑锋 [摘要] 目的 构建携带 IL-2／NK4双基 因真核表达载体 的减毒沙 门菌菌株 。方法 利用分子克隆技术将 IL-2 及 NK4基 因分别插入 PIRES—SEQ质粒 IRES序列的上下游 中，构建为双基 因真核共表达载体 pCMV—IL一2-IRES—NK4， 将该质粒利用脂质体转染入细胞 ，采用 ELISA及 PCR法检测 pCMV-IL一2一IRES·NK4转染细胞后 IL一2／NK4基因及蛋 白 表达情况。将所构建质粒 以电转化法转化减毒沙 门菌菌株 Ty21a，从而得到能够表达 IL一2／NK4双基 因的重组减毒沙 门菌菌株 。结果 ELISA及 PCR法检测该质粒可在细胞 中以较高的效率稳定表达 IL2·及 NK4基 因和蛋 白；同时表 达 IL．2／NK4双基 因的减毒沙 门菌菌株 TPIN构建成功 。结论 本研究成功构建 了携带 IL一2／NK4双基因的减毒沙 门 菌菌株。 [关键词] 白细胞介素 2；沙 门菌菌苗 ；基因；遗传载体 [中国图书资料分类号] R186．9 [文献标志码] A [文章编号] 2095140X(2014)07—0028—05 [D0I] 10．3969／i_issn．2095—140X．2014．07．008 Constructionofan Attenuated Salmonella Typhimurium Containing IL 2· and NK4 Co--expressed Eukaryotic Vector ZHANG Shang—di，HA Xiao-qin，YANG Zhi—hua，LIBing，DENG Zhi—yun，JIANG Dong·hong，ZHANG Jun，WANG Jian—feng(DepartmentofClinicalLaboratory，LanzhouGeneralHospitalofLanzhouMilitary AreaCommand，Lanzhou 730050，China) [Abstract] Objective ToconstructanattenuatedSalmonellatyphimuriumstrain(TPIN)containingIL一2and NK4CO—expressedeukaryoticvector．Methods AEukaryoticexpressionvector(pCMV—IL一2一IRES—NK4)wasconstruc— tedwhichcontainedIL一2andNK4genesbygeneticengineeringtechnology．Thevectorwastransfectedintocellsusingli— pofectaminanddetectedtheexpressionlevelsofIL一2andNK4byenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)andpol— ymerasechainreaction (PCR)methods．Andthen，thevectorpCMV—IL一2-IRES—NK4wasconductedintoanattenuated Salmonellatyphimurium Ty21abyelectrotransformationtobuildTPIN．Results TheIL一2／NK4CO—expressvectorsteadi— lyexpressedtheIL-2andNK4genesandalbumenwithhighlevelsbyELISA andPCR detection；theattenuatedSalmo— nellatyphimuriumDNAvaccinewithIL一2／NK4genes(TPIN)wasconstructedsuccessfully．Conclusion Anattenuated Salmonellatyphimurium straincarryingIL一2／N