小鼠抗病毒基因viperin的原核表达及其抗原性探索.pdfVIP

基凶组学与应用生物学，2014年 ，第 33卷 ，第 1期，第 63—68页 Genom icsandAppliedBiology，2014，Vo1．33，No．1，63—68 研究报告 ResearchReport 小鼠抗病毒基因viperin的原核表达及其抗原性探索 唐海波-。钟桃珍 罗扬2邢杏伟2钟一治 廖芳z 马净 李晓宁0 廖素环 2 梁晶晶12 罗廷荣1,2 1亚热带农业生物资源保护与利用 家重点实验室，广西大学 南宁，530004；2广西大学动物科学技术学院，南宁，530004 通讯作者．tingrongluo@gxu．edu．cn 摘 要 Viperin是一种 由1型和 Ⅱ型干扰素诱导的宿主蛋 白，在进化上高度保守。本研究以小 鼠脑组织为 原材料，通过 RT．PCR扩增得到包括完整 openreadingframe(ORF)的 1155bp的 eri基因序列，成功亚 克隆并构建了原核表达载体 pET一32a．vip，将其转化到大肠杆菌Rosetta中进行原核表达 。结果表明：原核表 达的重组蛋白viperin主要 以包涵体的形式表达，用镍离子亲和层析法获得纯度较高的viperin蛋白，为探讨 原核表达的viperin抗原特性，将纯化的viperin蛋 白免疫4周龄 昆明小鼠，制备得到抗 viperin多克隆抗体 。 经 Westernblot和 IFA检测 ，该抗体能与真核细胞 自然表达 的viperin反应，特异性 良好且效价高，表明原核 表达的viperin具有 良好的抗原性。获得的多克隆抗体为进一步研究viperin的抗病毒生物学功能奠定了良 好的基础。 关键词 Viperin，原核表达，抗原性，小鼠 ProkaryoticExpression ofM ouseViperinGeneandPreliminaryStudyon theAntigenicityofRecombinantProtein TangHaibo ZhongTaozhen LuoYang XingXingwei ZhongYizhi LiaoFang M aJing LiXiaoning LiaoSuhuan。·LiangJingjing。 LuoTingrong’ 1StateKeyLaboratoryforConservationandUtilizationofSubtropicalAgro—bioresources，GuangxiUniversity，Nanning，530004；2CollegeofAnimal SciencesandVeterinary M edicine，GuangxiUniversity，Nanning，530004 Correspondingauthor，tingrongluo@gxu．educn DOI：10．134l7j／．gab．033．000063 Abstract ViperinisakindofhostcellularproteinwhichisinducedbytypeIandtype11interferonandishighly conservedinevolution．Inthispaper，wehaveclonedafull—lengthopenreadingframe(ORF)ofviperingene containingl155bprfom braintissueofmouseusingRT—PCR．TheViperingenewassuccessfullysubclonedandre— constructed theprokaryoticrecombinantexpressionvectorpET一32a—vip．thentransformedintoE coliRosetta (DE3)．Theresultsshowedthatthevipermproteinwasexpressedinaformofinclusionbodiesbyprokaryotic expression system．Andtheviperinproteinwasobtainedwithhighpuritybynickelionaffinitychromatography methods．ToinvestgateantigenicityoftheprokaryoticexpressedViperin，thepurifiedviperinwasusedtoimmune theKunmingmiceforpreparationofpolyclonalantibody．W esternblotandIFA analysisdem