海洋星虫多糖提高作业能力作用研究.pdfVIP

·海洋生物工程与海洋生物伤害防治· 海洋星虫多糖提高作业能力作用研究 沈先荣，刘玉明，蒋定文，何颖，侯登勇、李珂娴 钱甜甜，陈伟，王庆蓉，莫琳芳 一、海洋星虫多糖对小鼠的免疫调节作用 (一)免疫抑制小鼠细胞免疫的影响 1试验目的 辐射损伤，化疗药物往往会造成机体免疫系统功能下降，本试验通过环磷酰胺造成小鼠 免疫抑制模型，观察海洋星虫多糖对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。 2试验内容 2．1试验材料 海洋星虫多糖，海军医学研究所实验室自制，批号090328，性状为灰白至淡黄色粉末， 无臭，昧微腥。海洋星虫多糖4．0 g加水100ml溶解，配成40g／L作为小鼠高剂量组用药， 中、低剂量组稀释20g／L和lO g／L浓度溶液。 阳性对照药云芝多糖[1，2]购自上海维编生物科技有限公司，批号201006，性状为灰 白粉末，无味。称取云芝多糖2．0g加水50m1混悬，配成40g／L混悬液作为阳性组用药。 m∥L 的溶液，过滤除菌，在-20℃保存备用。MTT，sigma公司产品，将5mgMTT溶于lmlpH7．2 ml1 的PBS中，现用现配。96ml异丙醇中加入4 mol／L的HCl，临用前配制。 2．2实验动物 BalB／c小鼠，雄性，60只，7--一8周龄，体质最(20±1)g。动物质量合格证编号： 动物中心SPF级动物实验室内。 2．3YAC-I细胞 购自中科院细胞所，传代到对数生长期时使用。 2．4试验仪器 756MC可见一紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂)；电子天平(北京赛多利斯仪器 系统有限公司，京)。MultiskanAscent型酶标仪(Themo公司产品)． 2．5试验设计 蒸馏水配制后经El灌胃给药，给药体积0．2ml／20 g。实验分为以下6组，每组lO只。 各组给药剂量及频次为空白对照组，给予蒸馏水；模型对照组，给予蒸馏水；阳性药物对照 组，给予云芝多糖400mg／kg，1次／d，连续7 d：低剂最组，给予海洋星虫多糖100mg／kg， 1次／d，连续7d；中剂量组，给予海洋星虫多糖200 mg／kg，1次／天，连续7d；高剂量 d。 组，给予海洋星虫多糖400mg／kg，1次／d，连续7 2．6模型制备 方法主要参考文献。除正常对照组小鼠10只外，其余50只先用环磷酰胺造成免疫抑制模 型，即连续7d腹腔注射环磷酰胺(剂量40mg／kg，1次／d)，同时每天灌胃给予受试药。 2．7观察指标 2．7．1 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验(MTT法) 方法：无菌取小鼠脾脏，置于盛有适量无菌Hank’S液平皿中，lml玻璃注射器头轻轻 作者单位：200433上海，海军医学研究所 376 r／min 将脾脏磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，Hank’S液洗2次，每次离心1000 ×10 min。然后将细胞悬浮于lm1的完全培养液中，台酚兰染色计数(活细胞数应在955 ml， 以上)，调整细胞浓度为3×lO“个／ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔l p1 一孔加75 ConA液(相当于7．5mg／L)，另一孔作为对照，置5％C02培养箱中37℃ ml，加入0．7 培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0．7