甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究.pdf

理学硕士论文 甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究 甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究 学科专业 动物学 研究方向 分子遗传 导 师 魏 泓 作 者 胡 蓉 2001352 中文摘要 甲型肝炎是由一种经由肠道传染的病毒即甲型肝炎病毒 Hepatitis A virus HAV 感染肝脏细胞而引起的急性传染病 是严重威胁人类健康的世界性传染病 转基因植物食用疫苗具有接种简便 成本低廉的优点 是目前正在进行的一项新 的探索 本研究选用柑桔作为表达甲肝病毒衣壳蛋白的生物反应器 将果实作为可 以直接口服的疫苗 旨在探索一种甲肝疫苗新途径 HAV 基因组编码的衣壳蛋 白决定病毒的抗原性 免疫原性和对敏感细胞的吸附性 是探索 研究基因工程 疫苗的焦点 为实现 HAV 衣壳蛋白基因 HAV-CP 这个重要功能基因的表达 调控 选用含有花椰菜花叶病毒启动子 CaMV 35S 启动子 的植物表达载体 pBI121 作为基本框架 将HAV-CP 基因插入质粒T-DNA 左右边界区间内 构建 pBI121-HAV -CP 植物表达载体 经限制性内切酶分析和PCR 鉴定后 利用冻融 法将重组质粒 pBI121-HAV-CP 导入根癌农杆菌 LBA4404 中 以锦橙 Citrus. Sinensis Osbeck 上胚轴为转化受体材料 农杆菌浸染10 分钟 共培养2 天 头 孢霉素脱菌培养后选用50 mg/L Km 进行筛选培养 120 株外植体中筛选出13 株 拟转化芽 微嫁接于砧木 经PCR 检测有5 株已导入外源目的基因 本研究建立了完整的转基因柑桔甲肝疫苗遗传转化技术路线 获得了导入 HAV-CP 基因的柑桔植株 为深入研究转基因柑桔甲肝疫苗的有效性 安全性提 供了基础材料 并在技术和方法上进行了理论探讨 关键词 甲型肝炎病毒衣壳蛋白基因 柑桔 载体构建 遗传转化 食用疫苗 1 理学硕士论文 甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究 Primary Study of Edible Vaccine of Transgenic Citrus with Hepatitis A Capsid Protein Gene Major: Zoology Speciality: Molecular genetics Supervisor: Prof.WEI HONG Author: HU RONG ABSTRACT Hepatitis A is caused by hepatitis A virus (HAV). Edible vaccine has been a subject of research for many years because of the economic importance of the application and the potential for future. The HAV capsid is composed of structural proteins: VP1, VP2, VP3, and, possibly, VP4. Multiple antigen peptides (MAP) have been demostrated to be efficient immunological reagents for