人类心脏表达新基因ZNF411和ZNF415的克隆与功能研究.pdf

摘 要 心脏是脊椎动物器官发生过程中最早形成的结构之一。心脏发育 足一个复杂的过程，它受一系列基凶的精确调控。鉴定在心脏发育过 翟，起调控作崩的鹾冈和分子途径，将促进人们从分子水平认识心脏 发仃和先人性心脏病发牛的机制。锌指基因家族是最大的人类摹因家 族之一，其蛋白产物t要通过Lj J，K DN^结合而起控制转录的作用。MA 信号传导途径足广泛存在于脊椎动物细胞调控的一种机制，许多转录 网子足霞要的MAPK靶分子。为了鉴定控制心脏发育和疾病发生的新 弘|大1，本研究从心脏cI)NA文库中克隆了两个人类新基因，珊￥，，和 朋7一V／。元它们都位于19号染色体上，属于cys2／His2型锌指蛋自家 族。Nonhcrn杂交结果表明加心，，在心脏和骨骼肌表达而獬，，5 』{柱：心胴?t}t姒烈表达，表明这两个基因可能对心脏发育调控起着重要 作用。通过构建增强型绿色荧光蛋白与幼恻／／和乃弘翟巧融合基因 的真核表达载体，转染cOs～7细胞系，瞬时表达后荧光显微镜观察了 它们编码蛋[_|的活细胞定位及表达，证明这两个基因均定位于细胞 核，足一种核转录调控蛋白因子。利用Irmoc固相多肽化学合成法合 成了zww／厅基斟的20个氨基酸的多肽，片j兔血清免疫的方法得到了 嬲≯v／万基I大1的多克隆抗体，这为从免疫组织化学方面研究它的功能 提供了便利。报道基因分析证明珊￥』』是一个转录抑制因子，当 zNl?4l l蛋白在cOs一7细胞中过量表达时抑制AP一1和SRE的活性，这 表明删一￥』，可能是MAPK信号途径中的负调控因子。综合这些结果， 我们口r以初步得出结论，z～丹』，和西阿，5是心脏发育过程的调控因 子，叮能是心脏疾病发生的候选基因。 关键词： 基因克隆，转录因子，心脏发育，细胞定位，MAPK信号途 径 ABSTRACT 2n，。￥／，is and that probably SI{L，suggesting Taken i vc inMAPK ingpathway． togcthcr， nog}ILrcguIatorsignal 1IhehearLis oneoffirst structurestoformhoarL duri during Ll Factors ZW，V／万are 1ational ng ZV一7／／and rcg s inLhcvertebrate． isa ()rgan()gcnosi Cardiogenesisdisoascs． oI’heartvery and ndidaLc L y genes dcvcl()pIIlcnpr()habl andit c()mplcxprocoss requires了菱订#；_I盱1量x￥许嚣}孽y譬近矗礁彗f前冉 墼言HN、订嚣÷ 羹羁自i毯sfiiLics()f、AI)一I facLor heart