siRNA沉默SUMO-1基因对肝癌细胞SMMC-7721Bcl-2及c-myc表达的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 目的：SUMO．』基因调节许多和癌症发生、发展有关的蛋白的功能，和癌 症的发生、发展关系密切。研究发现，在肝癌细胞株SMMC．7721及临床肝癌标 本中SUMO．J『基因明显高表达，进一步提示SUMO．1基因和肝癌的发生相关。 SUMO．1基因表达的效果及 本实验研究siRNA沉默人肝癌细胞SMMC一772l SUMO．1基因沉默后对SMMC．7721 bci．2及c-myc基因表达的影响。 方法：用脂质体转染法瞬时转染待筛查的三对人工合成的针对人SUMO．1 基因的siRNA片段和空白对照这四组细胞，转染终浓度为100nM，在转染后24、 Blot检测SUMO．1 48、72小时分别提取RNA及总蛋白，采用RT-PCR及Western 基因的表达，筛查出有效SUMO．1基因siRNA片段。实验分四组，有效的SUMO-l 2000组，并用与前三组具有相同 基因siRNA组，阴性对照组，LipofectamineTM 遗传背景和代数的SMMC一7721细胞作为未处理细胞组。用脂质体转染法瞬时转 染四组细胞。提取各组细胞总RNA，合成eDNA，用聚合酶链反应(PCR)检测四 组细胞中SUM0-1、Bcl．2及c—myc表达情况。使用蛋白抽提液分别提取四组细胞 blot法检测细胞中 的总蛋白，使用全自动生化分析仪测定蛋白浓度，Western SUMO-1、Bcl．2及c-myc表达量变化。 沉默效果最好，24小时RT-PCR测得沉默效果为9．80％，48小时沉默效果为 73．43％，72小时沉默效果为46．56％，其中48小时沉默效果达到实验的要求。 Western 显下调，而且变化规律和SUMO．1表达水平一致，差别明显(P0．001)。 SUMO．1基因表达的方法， 结论：siRNA是一种理想的沉默SMMC．7721 明SUMO．1控制癌基因Bcl．2及c-myc的表达。 关键词：SUM0—1，siRNA，肝癌，Bcl一2，c—myc，SMMC一7721细胞 Abstract ABSTRACT controlsthefunction whichassociatedwiththe objective：SUMO一1gene ofproteins and ofcancerRecentstudiesshowedthatthe of development genesis expression 1 SUMO一1inSMMC一772and hepatocellularcatcinomas(HCC)tissues expressed markedcontract further that enhancement，The SUMO一1isassociated suggest gene withthe ofcancer．Theaimsthis was genesis of studytoevaluatethe of