DB13T 221-1994 玉米杂交种及自交系、小麦种子纯度检验方法－蛋白质电泳法.pdfVIP

DB 河 北 省地 方 标 准 玉米杂交种及自交系、小麦种子纯度检验方法 一一蛋白质电泳法 DB13/T221一94 1994-11--21发布 ___ 1994一12一01实施 河 北省技 术 监督局 发布 河 北省 地 方标 准 玉米杂交种及自交系、小麦种子纯度检验方法 一一蛋白质电泳法 DB13/T221-94 主题内容与适用范围 本标准规定了蛋白质电泳技术快速测定种子纯度原理和试验方法。 本标准适用于玉米杂交种、玉米自交系和小麦种子。 2 引用标准 GB8170数值修约规则 GB3543农作物种子检验规程 3 术语 3.1 特征蛋白质，某一品种的作物种子所含有的特定的不同于该作物其它品种的基因，该基因所决定的 蛋白质也就不同于其它品种的蛋白质，因此定为特征蛋白质。 3.2 纯度 本品种的种子粒数占供检样品总数的百分率即为供检品种纯度。 4 原理 将玉米或小麦种子贮存蛋白质利用电泳技术进行分离，得到蛋白质指纹图，根据玉米或小麦品种的 特征蛋白质进行品种鉴定，然后计算出纯度。 5 试验方法 5.1仪器设备 5.1.1稳压稳流电泳仪0-600V0.200mA 5.1.2 双板夹心电泳槽 5.1,3 高速离心机:最高转速为1600。转/min 5.1.4 天平，称量2009，分度值10mg 5.1.5 微量进样器0-50P1 5.1.6 注射器0~2ml 5.1.7 50ml锥形瓶 5.1.8 带盖搪瓷盘 5.1.9 移液管0-10ml 河北省技术监.局1994-11-21批准 1994-12=01实旅 一 1一 DB13/T221--94 5.1,10 吸液器0-10m1 5.1.11医用X光片观察仪 5.1.1Q 可调徽最取样器0-1200”1 5.1.13 1,5ml离心管、吸液尖 5.1.14液体快速混合器 5,2试剂和材料 5,2.130肠丙烯酸胺 (Acry )-N-N一甲叉双丙烯醉胺(Bis·)母液 称取150.OOgAcry.和4.OOgBis·，溶于300MI热蒸姗水中，趁热过滤，并定容到500m1,低温保 存(0-4OC)(5.2.2,5.2.3,5.2.4,5.2.5保存条件相同) 5.2.21090过硫酸钱 称取1.009过硫酸钱，溶于lOm】水中 5.2.3 TEMED:用原液 5.2.4 蛋白质提取液 9.00gSUP溶于150m1水中 5.2.5 1肠甲基绿指示剂 1.009甲基绿溶于少许乙醇，然后加入IOOM150呱的甘油溶液，摇匀即可。 5.2.6 阳极室电泳液:吸取4ml乳酸溶于500m1水中。 5.2.7 阴极室电泳液:称量3.009Tris，并吸取2ml乳酸溶于500m1水中。 5.2.8脱色液 乙醇 :冰乙酸 :水=20e7:73 SA.9 0.5呱的考马氏亮蓝R250染色液 1.009考马氏蓝溶于少许乙醇，加入200MI脱色液即可(染色时稀释10倍) 5.3试验步骤 5.3,1扦样 扦样及平均样品的制备，按GB3543执行。 5.3,2样品制备 5.3,.2.1从做完净度后的种子中，随机取试样2-4份，每份100位，逐位粉碎后(粉碎粒度!mm) 目‘t公确. 。二 ，t 口11-),V,、 i*r.._rtC 闷， 5,3.2.2吸取。.35ml蛋白质提取液，顺次加入离心管，然后将离心管放入液体快速混合器中，振荡 IOmin，振荡完