转基因动物的遗传修饰与应用(下).pdfVIP

遗传 HEREDTTAS(Beijing)17(3):46-481995 ·综 述 · 转基因动物的遗传修饰与应用 下（） 程炜中 刘应伯① 余其兴 武（汉大学生命科学学院遗传学系，武汉430072) TheGeneticModificationandApplicationofTransgenicAnimals(II) ChengWeizhong LiuYingbo YuQixing (DepartmentofGenetics,SchoolofLifeSciences,WuhanUniversity,Wuhan430072) 3．转基因动物的遗传表现及变异机理 目前，大多数外源基因在导人受体动物细胞后都能比较 真‘实’地进行表达并产生特定的表型特征，甚至具有十 分明显的遗传效应，如生长激素基因转移所获得的超级小鼠和鱼，许多人体蛋白基因转人山羊、小鼠和奶牛细胞获 得泌乳性药物以及人类遗传病和致毒致癌动物模型的应用等，其中有些转基因动物亦可将其所携带的外源基因通 过性腺传递给子代．然而，转基因动物及其有性后代也常常发生较大的遗传嵌合、不定变异和异常分离，因而也极 大地限制着转基因动物的广泛应用．究其原因，主要涉及到外源转基因在转基因动物细胞染色体中的位置效应、 插人诱变、从头甲基化、调控元件缺失和镶嵌一杂合效应等． 3.1位里效应 转基因动物中外源基因的整合状态与该基因的表达调控关系极大，如基因所整合的染色体及其特异位点、所 整合基因的拷贝数及排列方式、转基因过程中所诱发的其它序列的重排和插入诱变等，因此常常是同一基因的不 同转基因系中该基因的表达水平变化很大．用兔 卜球蛋白基因和人一鼠杂合 卜球蛋白基因进行转基因小鼠研究 表明，在大多数转基因小鼠中外源基因拷贝变化数为每二倍体细胞含5-50个，且大多数基因拷贝保持完整；进而 用原位杂交技术也证明了在同一转基因鼠中所有拷贝都整合在同一染色体位点上，Southern分析也证明被注人的 DNA常以头一尾随机衍连的形式进行整合，但不同转基因小鼠中外源基因所整合的染色体位点却不同；S：核酸酶 保护试验也证明了在这些不同的转基因小鼠中，所整合的外源基因有的表达活性很低，有的则根本无表达活性，其 中只有当 卜球蛋白基因整合在小鼠第3号染色体的外源基因才可在转基因小鼠的骨骼肌中表达．其它转基因动 物如转基因鱼、转基因奶牛和转基因奶山羊中外源基因的整合与表达也有类似表现．这种位置效应不仅影响外源 基因的表达水平，而且也影响外源基因的发育模式，以致具有同一外源基因但不同染色体整合位点的不同转基因小 鼠中该基因的转录就在不同时期和不同组织中被激活． 3.2插入诱变 外源基因或DNA片段随机插人受体细胞基因组，能够引起该插人位点基因阅读框改变，包括移码突变和插人 失活等．实验证明，在一种Moloney鼠白血病病毒M（-MuLV)转基因鼠中，DNA序列的变异常常引起基因表达 模式的改变．实际上，所有转基因动物中外源基因的毒性整合所造成的胚胎死亡、不育、病变、不能抚育后代和 其它干扰遗传性状正常形成等特征的出现，均与外源基因的插人诱变有关，其随机插人机理尚不清楚，作者认为， ①现工作单位：武汉市职工医学院，430016. 3期 程炜中等：转基因动物的遗传修饰与应用 下（） 47 这可能是在转基因细胞胚胎发育过程中，外源基因的随机插人伴随内源抗体遗传系统基因动态重组过程而出现， 并由此形成转基因重组胚系，于是形成转基因动物的嵌合性和多样性． 3.3从头甲基化d（enovoMethylation) 转基因动物中外源基因的从头甲基化可以干扰该基因本身的正常表达，并由此造成转基因表达功能的降低或 丧失，这种情况在鼠胚胎转基因后经常出现．如Arak等人在进行乙型肝炎病毒H（BV)研究时，就发现在一个转基 因小鼠品系中，所整合的三个外源基因申联拷贝全都被甲基化而失去表达功能，但用5-氮胞昔注射处理这种刚出 生的小鼠时，发现三周后便有HB产S的产生，证明这种经处理的小鼠DNA甲基化程度显著降低，从而说明从头甲 基化确实能使转基因活性降低甚至失活．这种情况在其它转基因动物中也有报道． 3.4调控元件缺失 在目前所研究过的转基因鼠中，由于外源基因能够从它们的正常位点上切离下来再