转基因鱼研究中的若干问题.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)15(3):40-431993 ·综述 · 转基因鱼研究中的若干问题 蒋 耀 青 （中国科学院遗传研究所，北京100101) 本文综述了近年来转基因鱼研究的某些进展，主要涉及外源基因导人的方法、基因转移提高鱼类抗 性的主要内容 如（：促进生长，提高抗冻性及抗病性等）．此外，还对我国转基因鱼研究的主要工作进行 了介绍． 关健词 鱼类，基因转移 SomeProblemsintheStudyonTransgenicFishes JiangYaoqing (InstituteofGenetics.AcademiaSinlca,Beijing100101) 1980年以来，Palmiter等将外源基因注射人哺乳类受精卵以产生转基因动物．最著名的例子为生长加快的 小鼠．此后，有学者利用显微注射将外源DNA转移人海胆、爪蟾、果蝇、小鼠，甚至兔、羊、猪、牛中22‘)· 鱼类是研究转基因动物的良好材料，因为一条雌鱼就能提供成千上万个卵，它们行体外受精，胚胎注射较哺乳类简 单．本文将对外源基因导人鱼类的最新进展，以及转基因鱼在促进生长、抗低温和抗病方面的研究现状进行评 述． 一、基因转移的方法 1．显徽注射 产生转基因鱼的最普通的方法是将外源DNA在受精后最初几个小时内 （1-4细胞阶段） 注射人受精卵细胞质中．1985年以来，不同的基因通过显微注射法被导人鱼中 表（1), 表 1用于转基因鱼研究的基因及鱼种 鱼 种 鲤、娜、贴、金鱼、泥鳅、medaka,继、罗非鱼、虹缚、斑马鱼等 基 因 hGH,hGHCDNA,rtGHCDNA,CCR,E.colineo,Exollhygro,E.coligal.JLur,fAFP等 启动子 RSV,mMT,SV40,fLur,fAFP等 但是，大‘多鱼种注射其受精卵时常难放穿透卵壳，解决的办法见吴清江文1（989)，本文不再赘述．此外，也有 学者采用另一种显微注射法来穿刺卵壳，如将鸡的晶体蛋白基因注射人medaka卵母细胞的生发泡 (germinal vesicle）中2〔) 2.逆转录病毒感染 因缺乏鱼类特有的特异逆转录病毒，此法用放基因转移受限制． 3．电击法 此法曾成功地将基因转人多种分离细胞 1〔1).Hallerman等 （1989）最早试验用电击法将 CAT基因转人金鱼受精卵12)1，但未获成功．水生所谢岳峰等 （1989)成功地用此法获得转基因泥鳅，整合率 达10% （）‘．近年，Inou。等 （1990)124，用电击法得到了转基因medaka,还检测到了：tGH的表达．但如何提 40 高整合率，使此法成为一种新的实用技术，是尚待研究的问题． 4.染色体介导的甚因转移 在这些研究中 2（9,14,15)，正常虹缚及搏鱼的精子用Y-辐射使父源DNA断裂． 白化雌鱼的卵与处理过的精子受精后，热休克得雌核发育二倍体鱼．2-13％的实验鱼胚能存活并发育．这些胚 胎除常规数目的染色体外，还含有额外的染色体片段．这些父源基因能复制和保存至成体中，还能表达．转基因 亲鱼的额外染色体片段也能被子代所遗传。 5，成熟精子作载体法 1989年意大利Lavitrano等人报道25〔)，他们利用成熟精子作载体，成功地将外源 DNA导人小鼠卵细胞，获得转基因动物．中科院发育所于建康等 ’（。，成功地以鱼精子为载体，并得到好的结 果．但由于国内外科学家未能重复出相同的结果，因此需要更多资料来确证实验的可靠性．目前此法尚不能用于 转基因鱼的研究中． 二、转基因鱼研究中基因的选择 大多研究转基因鱼的学者，兴趣较集中于加速生长、抗低温及抗病性方面．必须强调指出，目前水产养殖方 面转基因研究尚处于早期阶段，有些工作的设计原先并未考虑直接的实践应用意义。但选用生长激素基因及抗病 蛋白基因，无疑部分原因是因为