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遗传 HEREDITAS(Beijing)20(1):42-x441998 转基因植物生产动物疫苗的研究及应用 范国昌1,2 山 松1钱凯先2沈桂芳1 (1．中国农业科学院生物技术研究中心．北京，100081)(2．浙江大学生物科学与技术系，杭州310027) ResearchandApplicationonTransgenicPlantsasVaccineSource FANGuochang,“SHANSongQIANKaixian2SHENGuifang (1.Bio-TechResearchCentre,CAAS,Beijing100081) (2.DepartmentofBiosciencesandTechnology,ZhejiangUniversity,Hangzhou310027) 植物基因工程的主要目标是创造出具有丰产、优质、抗病虫、抗除草剂、抗寒、抗早、耐盐碱等优良性状的 作物新品种。随着高效基因载体系统和遗传转化技术的发展，植物基因工程技术又出现一个新的生长点，即利用转 基因植物生产动物疫苗．目前，这项研究尚处于实验室阶段，但由于其应用前景可观，已引起免疫学家、分子生物 学家和植物学家的极大兴趣与关注。本文就该领域的研究发展、方法、特点及应用前景作一综述。 1动物基因对植物的转化及其表达的研究 动物基因转人植物的最早报道是 1983年Shaw等把兔子尹一球蛋白的基因组基因转人烟草，但没有得到表 达川二随后人们又将鸡的：一肌动蛋白、卵清蛋白、人：一球蛋白基因转人烟草，也得出相似的结果 2〔，，即：完整 的动物基因包（括启动子、内含子、加尾信号）在植物中不能转录或正确加工。以后一系列研究结果表明，植物不 能识别动物基因的转录起始、终止和加工信号，然而用cDNA代替基因组编码序列，在植物中有作用的启动子和 终止子调节下，来 自动物的cDNA都可以在植物中有效地转录和翻译。例如：鼠金属硫蛋白m（MT)基因在 CaMV35S启动子和豌豆核酮糖二磷酸梭化酶小亚基r（bcS)基因启动子的指导下，在烟草中得以表达，转基因幼苗 对9毒产生抗性c3)。德国MaxPlanck作物育种研究所的During等人(1（990）分别将编码抗体轻链和重链的 cDNA转人烟草转基因植物能合成轻链和重链，并组装成有活性的抗体 4〔)。目前，在转基因植物中已成功表达了 人生长激素、白细胞介素-2、干扰素、人血清蛋白、血红蛋白、胰岛素、人表皮生长因子、萤火虫荧光素酶基 因、比目鱼抗冻基因及乙肝表面抗原基因等 5（一’。〕。 2转基因植物生产动物疫苗的方法及途径 2.1重组植物病毒 方法是将植物病毒进行遗传改造，使其携带外源基因，此重组病毒能在宿主植物中增殖，同时外源蛋白在病毒 粒子表面表达以确保抗原性。 991豆花叶病毒(C（PMV）分子结构的研究表明，CPMV粒子由两个衣壳蛋白组成：大L（)蛋白和小S（）蛋白，每个S 蛋白形成刀一桶状次级结构，每个 卜桶状结构含8股反向平行的fl-折叠，彼此由不同的环相连。环的重要性在于 它们暴露于病毒粒子表面，在该处可被迅速识别以确保强免疫反应。英国JohnInnes研究所的Lomonssoff博士 (1992)构建了CPMV两个基因组RNA的全长 cDNA克隆，并将 口蹄疫病毒F（MDV)和艾滋病毒H（IV)表面蛋白 基因成功地插人S衣壳蛋白基因的刀B-刀C环编码区中，重组质粒转录RNA，并用其以机械方式接种于虹豆植 2期 范国昌等：转基因植物生产动物疫苗的研究及应用 43 株。10天后，接种过的植株显示与被野生型CPMV侵染植株不同的症状。接种植株的叶提取物的电镜检测显示， 存在聚集的CPMV状颗粒。由被侵染的叶组织纯化出杂合的病毒粒子，Western印迹分析表明，其保留了FMDV 专一性环。他们用这种杂合病毒粒子制备了用于豚鼠的实验疫苗并进行免疫实验。结果显示，能诱导产生特异性 免疫应答 i〔v。 2.2农杆菌介导的核转化 将编码某种病原体中能引起机体保护性反应蛋白的结构基因克隆到Ti质粒上，然后用这种重组质粒转化农杆 菌。携带重组质粒的农杆菌感染植物细胞后，导人的外源基因可能整合到这些细胞的染色体上。含整合外源基因 染色体的植物细胞在一定条件下可以长成新的植株。此植株可以在生长过程中表达外源