中国仓鼠细胞和人胃腺癌细胞间期染色质凝聚的变化.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing) 4(4);15一161982 中国仓鼠细胞和人胃腺癌细胞间期染色质凝聚的变化’‘ 茅一萍 蒋 清 王世滚 （南京铁道医学院生物学教研室） 染色体组在整个细胞周期 中是连续存在 总数约为 106-107个。用无血清的RPMI-1640 的。但在光镜下观察，绝大多数真核细胞的间 培养液洗涤，并收集细胞，反复离心两次 （1,000 期核仅能见到网状的结构— 染色质，只有当 转／分），去除上清液，加人0.7m150%PEG溶 细胞进入有丝分裂期才出现凝聚和盘绕成棒状 液，用滴管轻轻吹打，使之混匀，37℃静止1-2 的染色体。然而，运用体细胞融合技术使有丝 分钟，随后逐渐加人上述无血清的培液至 lOml 分裂的细胞和间期细胞相融合，将会导致间期 37℃下继续静止5分钟，接着洗涤离心三次，充 核的染色质凝聚为染色体样的结构。1970年 分去除PEG。洗毕将细胞悬浮于含10多小牛血 Johnson和 Ra。将这一现象命名为熟前染色体 清的RPMI-1640培养液中，37℃温育30分 凝聚 (prematurechromosomecondensation)，简称 钟。收获细胞，按常规染色体标本方法制片。 PCCIIJ。这种类似染色体的结构被称为成熟前 2．单层融合法 60-70务 生长汇合的 凝聚的染色体p（rematurelycondensedchromosome)单层细胞，用秋水仙素处理 最（终浓度0.12,ug/ 亦简称为 PCC,,PCC技术可使我们用光镜直 ml),4-10小时后，倒去培液。细胞面先经无 接观察间期染色体的形态变化。 血清的RPMI-1640培液2-3次洗涤，吸取50 PEG溶液铺盖于细胞生长面上，2-5分钟后， 材 料 和 方 法 尽量倒去 PEG溶液。 仍用上述 RPMI-1640 一（）细胞培养 分别用中国仓鼠(Cric- 液清洗细胞生长面，去除PEG，再用含10外小 etulusgriseus)Wg3一细胞株 ，〔和‘人胃腺癌SGC- 牛血清的RPMI-1640液370C温育30-60分 7901细胞株诱导PCC。用组织培养方瓶作单 钟。按常规胰酶消化脱壁收集细胞及染色体制 层细胞培养，选用含 10%小牛血清的 RPMI- 片。 1640合成培养基为细胞培养液。 结 果 二（）融合剂的配制 称取PEG粉末 聚（ 乙二醇，国产，分子量 1000,6000均可），于700C 悬浮或单层细胞经PEG处理，都可发生融 水浴熔融成液态，再与预热的无血清 RPMI- 合，产生多核细胞。在 PEG处理后温育30- 1640培养液等量混合，即得50拓PEG溶液。 60分钟制备的标本中，可观察到双核细胞、三 三（）PCC的诱发 参照国内外研究者 核以上的多核细胞，但以双核细胞为主。 在 建立的方法[2,6]，稍作改进。 PCC图象中也以I/M （即包含一个M期核和 1.悬浮融合法 细胞经同步化处理[37［s 一个I期核的双核细胞）的异相 h（eterophasic) 可获得80-90务M期分（裂期）细胞。水平晃 MaoYipingetal.:ChangesofInterphaseChromatin 动培养瓶，使培液冲击细胞生长面，可使M期细 Condensed inChinese Hamster Cellsand Human GastricCarcinomaCells 胞自然脱壁。I期 （间期）细胞可用胰酶消化收 1)复旦大学遗传所赠给Wg3-h和SGC-7901细胞株，江 集。两者按1:1的比例混合于离心管内，细胞 苏省卫生厅对本工作给予资助，特此致谢。