中国汉族人群间-α-胰蛋白酶抑制因子(ITI)的遗传多态性.pdfVIP

过 传 学 报，20(5);399-403,1993 ActaGeneticaSinica 中国汉族人群间-－a一胰蛋白酶抑制因子 (zzr)的遗传多态性 侯一平 菊 清 吴梅绮 华（西医科大学法医系，成都 610044) 我们建立了测定间一。一胰蛋白酶抑制因子遗传表型的聚丙烯酸胺凝胶等电聚焦免疫固定 技术，应用这种方法对居住在成都地区的汉族群体进行了群体研究和家系调查，结果表明中国 汉族人群间一“一胰蛋白酶抑制因子具有遗传多态性，它有希望成为法医血液遗传学新的遗传标 记。 关键词 间一“一胰蛋白酶抑制因子，遗传多态性，等电聚焦 A-a-胰蛋白酶抑制因子 I（nter-a-trypsin-inhibitor，简称 ITI或 Ial）是人血清中 一组分子量为18万道尔顿的糖蛋白5]‘。由于它具有抑制胰蛋白酶活性，电泳迁移率介于 。和‘a：球蛋白之间，Heide等将其命名为间一a-胰蛋白酶抑制因子61〔。以后的研究表明， ITI是一种丝氨酸蛋白水解酶抑制因子2[101990年德国学者 Vogt和 Cleve应用琼醋糖 等电聚焦技术，首次在德国人群中发现人类 ITI的遗传多态性1〔,1TI具有两个常见的 等位基因 （ITI?* 和 ITI*2）和一个罕见的等位基因 （ITI*3)oF1前，除在德国和奥 地利人群外 ，〔‘’］，国内外尚无见到在其他人群中发现 ITI遗传多态性的报道。 鉴于寻找新的遗传标记一直是遗传学、人类学和法医学的重要任务。找们建立了测 定 ITI表型的聚丙烯酞胺凝胶等电聚焦免疫固定技术，并对成都地区汉族人群进行了群 体研究和家系调查。本工作表明，中国汉族人群 ITI具有遗传多态性，它有希望成为法 医血液遗传学新的遗传标记。 材 料 和 方 法 （一）材料 用于群体调查的308份血样，系按分层随机抽样采自成都地区彼此无血缘关系的汉 族青年男女。用于家系调查的71份血样，采自居住在同一地区的21个汉族家庭，包活 42个父母和29个孩子。所有血样均为不抗凝血。静脉采血后，8小时内分离得血清，置 一80℃保存备用。 兔抗人 ITI抗血清购自丹麦 Dakopatts公司，V型唾液酸昔酶购自美国Sigma公 司，载体两性电解质 Pharmalyte购自瑞典 Pharmacia-LKB公司，象丙烯酸胺凝胶电泳 试剂为德国 Serva公司产品，醋酸纤维素膜为浙江黄岩生化厂产品，其余化学试剂均为 国产分析纯级。 本文于1992年2月9收到． 400 遗 传 学 报 20卷 二（）方法 用聚丙烯酸胺凝胶等电聚焦结合免疫固定技术测定 ITI表型。凝收板为130X80X 0.4mm，用总胶浓度为15并，交联度为2.6务的丙烯酸胺单体1.6m1,27.5;o甘油3ml,Pha- rmalytepH5-6和 pH6-8各。.18ml，四甲基乙二胺15u1配制。减压除气后，加2.5%过 硫酸胺 ，如1催化聚合。在等电聚焦之前，血清样本均用唾液酸昔酶处EJW.}酶浓度为2.51U/ ml，用 pH5.5,O.lmol/L醋酸钠缓冲液配制、每2Ofzl被测血清加1OJAI唾液酸普酶，混匀 后，室温放置24小时。 等电聚焦在瑞典 Pharmacia-LKB公司生产的电泳仪 Multiphor11上进行，正极液 为0.04mol/L谷氨酸，负极液为O.5mol/L氢氧化钠，电极间距为11.5cm，循环冷却水温 120C。加样前，凝胶板在功率5瓦，电压1500伏预置条件下预聚焦30分钟，预聚焦后，用 加样箔直接将样本加在凝胶表面，加样点距正极1cm，每孔加样9川。加样后按上述条件 聚焦30分钟。移去加样箔，继续聚焦 1小时，最后以2000伏聚焦2小时。 等电聚焦后，立即进行免疫固定，即将浸有抗 ITI抗血清的醋酸纤维素膜覆盖于凝 胶表面，室温湿盒放置 30分钟；揭下醋酸纤维素膜，将膜置于 pH7.2磷酸盐缓冲盐水 (PBS）中漂洗 1小时，膜上的抗血清与 ITI形成的免疫复合物区带，用0.5外考马斯亮蓝 R250染色。脱色液为冰醋酸一甲醇一蒸馏水 （1.4:约液W0