獐茅HAK基因表达调控区的分离及其在水稻中的功能分析.pdfVIP

HEREDITAS (Beijing) 2012 6 , 34(6): 742―748 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2012.00742 獐茅HAK 基因表达调控区的分离及其在水稻中的功能 分析 张高华, 王鹤, 王旭达, 丰明, 李怀梅, 李树英 , 116024 獐茅高亲和性 K+ 转运蛋白基因(AlHAK1 )是从单子叶禾本科盐生植物獐茅(Aeluropus littoralis (Gouan) Parl) 中克隆, 对于细胞营养和离子渗透调节起关键作用。为了进一步了解 AlHAK1 基因的表达调控机制, 文章 采用基因组步移法分离了AlHAK1 基因转录起始位点上游长度约 1.3 kb 的启动子区域。启动子顺式元件分析显 示该序列具有典型的 TATA 和 CAAT 盒, 以及一些与植物生长发育和环境响应相关的顺式元件。为了明确 AlHAK1 启动子的功能, 将其与 GUS 基因融合构建到植物表达载体pCAMBIA1301 上, 通过农杆菌介导转化法 导入水稻中。对转基因植株进行GUS 组织化学染色, 结果显示在转化AlHAK1 启动子水稻的根、茎、叶、花药 和内外稃部位均检测到GUS 活性。GUS 荧光定量分析显示AlHAK1 启动子调节GUS 表达活性低于组成型启动 子 CaMV35S 和Ubiquitin, 但其根部和茎部的 GUS 活性相对较高。对转化植株进行不同胁迫处理后检测GUS 活性, 结果表明受到ABA 、干旱、高温的诱导后其茎部和根部GUS 活性有所提高, 推测位于该启动子-682 bp 的HSE 元件和-1 268 bp 的MybBS 元件可能在高温、ABA 和干旱诱导的表达调控中起作用。 + 獐茅; 高亲和性K 转运蛋白基因(HAK1); 启动子克隆; 顺式元件分析; GUS组织化学染色 Isolation of the promoter region of HAK gene from Aeluropus lit- toralis and functional analysis in rice ZHANG Gao-Hua, WANG He, WANG Xu-Da, FENG Ming, LI Huai-Mei, LI Shu-Ying Institute of Dalian Biotechnology , Liaoning Academy of Agricultural Sciences , Dalian 116024, China + Abstract: The AlHAK1 gene encoding a high-affinity K transporter was isolated from Aeluropus littoralis (Gouan) Parl, a graminaceous halophyte, and plays a crucial role in nutrition and ion homeostasis in plant cell. To investigate the regula- tion role of AlHAK1 on the transcriptional level, an about 1.3 kb 5-flanking region of the AlHAK1 gene containing a puta- tive promoter was cloned by genome walking method. Cis-regulatory elements analysis showed AlHAK1-promoter region contained typical TATA and CAAT boxes,