长鼻？细胞株（PTK1）有丝分裂观察及染色体组型分析.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing) 6(1)43-45 1984 长鼻滩细胞株 P（TKI）有丝分裂观察 及染色体组型分析 邓燕华王兰岚宋桂英孙宝霞陆仲康梁 宏 （中国科学院遗传研究听，北京） 本文对长鼻兼 (PTKI）细胞有丝分裂过程 4-5天生长旺盛铺满单层时从培养瓶中倒去 及染色体进行了光学显微镜观察。PTK，细胞 旧培养液，用 1-2毫升的0.125多胰酶消化细 具有两个核仁，在有丝分裂过程中细胞基本上 胞5-10分钟，用吸管吹打细胞使其脱离瓶壁。 保持扁平。核型简单，11条染色体中，有两条 转人离心管内1000转／分离心5-10分钟， 染色体具有次溢痕结构。根据染色体大小，着 去胰酶液再加人适量的新培养液，使细胞浓度 丝点位置，有无次Ira痕等特点排列了染色体组 k;}Plth主吐3.5X1竺鱼鱼．，然后用注射器 型。 一－一 毫升 长鼻键(ratkangaroo)肾脏上皮细胞株有雌 把细胞注人已装配好的Rose小室，Rose小室 性 P（TKI）和雄性 P（TK,）两种。它是哺乳 先在5%的CO,培养箱37℃条件下恒温培养 动物中染色体数目比较少的一种材料，细胞在 约一昼夜使培养基保持适合细胞生长的pH值， 有丝分裂过程中基本上保持扁平，不卷曲，因而 以后再放到370C培养箱内培养，待出现大量细 染色体图像较清晰，在活体观察中容易分辨。它 胞分裂时拆开 Rose小室，取出有细胞面的盖玻 们不仅适合于作激光显微照射试验C4.5.5.7J，在细 片，做成特殊小室在目镜10X，物镜100X的 胞遗传学和细胞学研究领域里它是一种比较理 相差显微镜下选取生长良好，即将进人分裂的 想的试验材料。近年来，利用PTK细胞开展激 单细胞，连续追踪，观察该细胞的整个有丝分裂 光显微照射染色体、核仁、中心粒等细胞器对细 过程，记载各分裂时期的时间并对各分裂时期 胞进行显微外科手术研究细胞器的结构、功能、 照相。细胞培养，小室装配都必须在严格控制 基因缺失、染色体运动做了大量的工作。为了 的无菌条件下进行操作。 促进这方面工作的开展，我们在198。年首次从 二（）染色体标本制作 美国引人PTKI细胞株，现将PTKI细胞有丝分 将370C培养3天左右的细胞加人秋水仙 裂过程及染色体标本制片的光学显微镜观察结 素 （最终浓度为0.07ug/ml左右），继续培养 果报道如下。 4-6小时，使细胞停止在分裂中期。经0.125多 胰酶消化细胞，1000转／分离心收集细胞。用 材 料 与 方 法 0.075AfKC1(1，10）低渗处理 15-30分钟，使细 一（）细胞培养 胞膨胀。然后同样进行离心收集细胞，再用甲 本实验以PTK：细胞株为材料。PTK、细 醇一冰醋酸 (3:1)固定两次，各30分钟。 留 胞培养在含有15%国产小牛血清的Eagle生 Iml左右制成悬液，取 1滴滴于洁净的载片上， 长培养液里 其（中含青霉素最终浓度100单位／ 吹片，空气千燥，Giemsa溶液染色30分钟，冲 毫升，链霉素100微克／毫升）。 培养基的pH DengYznhunFta[.-MitosisObservationandKaryotype 调至 6.8-7.00 侯细胞在37℃条件下培养 AnalysisofPotoroustridactylisCellLine(PTK,) 43 去染色液。空气千燥镜检观察，照相。 无论从染色体大小还是从着丝点位置上都很容 易区分，称为近端着丝点染色体。第2对为