玉米钼辅助因子硫酸化酶基因启动子的克隆与功能验证.pdfVIP

Hereditas (Beijing) 2014 年6 月, 36(6): 584 ―591 研究报告 玉米钼辅助因子硫酸化酶基因启动子的克隆与功能验证 高学焕, 付凤玲, 牟巍, 周树峰, 张素芝, 李晚忱 四川农业大学玉米研究所, 成都 611130 摘要:为克服组成型启动子启动外源基因过量表达引起的诸多问题，同源克隆(Mo-molybdopterin cofactor sulfurase)基因（ABA3 ）的启动子(ABA3s )序列，并用PlantCARE 软件分析其非生物逆境应答元件, 实时定量PCR 检测ABA3 基因在非生物逆境诱导下的差异表达后。然后，用该启动子构建启动 GUS （β-glucuronidase ）基因 的表达载体, 基因枪法转化玉米愈伤组织。经组织化学染色法检测其表达后, 在高渗、高盐、低温胁迫处理及 ABA 诱导下检测 GUS 酶荧光值与荧光素酶( 内参)发光值的比值(GUS/LUC), 以此评价ABA3s 启动子在非生物 逆境胁迫下的启动活性。结果表明, ABA3 基因在模拟干旱、低温、高温、高盐胁迫及 ABA 、乙稀诱导下差异 表达, 说明该基因的启动子(ABA3s )具有非生物逆境诱导活性。序列分析表明, ABA3s 启动子全长777 bp, 含有 ARE 、HSE 、MBS 、TGA 、Circadian 等多种非生物逆境胁迫应答元件。用ABA3s 启动GUS 基因构建的表达载 体转化的玉米愈伤组织, 响应干旱、低温、高温、高盐胁迫等多种非生物逆境胁迫, 及ABA 和乙稀诱导, GUS 检测呈阳性。在 8%甘露醇高渗条件下, GUS/LUC 比值比空白对照高6 倍。上述结果表明, ABA3s 启动子具有非 生物逆境诱导特性, 经进一步验证其功能后, 可用于玉米抗逆转基因研究。 玉米; 非生物胁迫; 钼辅助因子硫酸化酶; 启动子 关键词: Cloning and functional validation of promoter of mo-molybdopterin cofactor sulfurase gene in maize Xuehuan Gao, Fengling Fu, Wei Mu, Shufeng Zhou, Suzhi Zhang, Wanchen Li Maize Research Institute , Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China Abstract: To overcome the problems caused by the over-expression of exogenous genes under the control of constitutive promoters, the promoter (ABA3s) sequence of maize (Zea mays) mo-molybdopterin cofactor sulfurase gene (ABA3) was cloned homologously, analyzed for its abiotic stress-responsive elements by the PlantCARE software, and detected for dif- ferential expression of the ABA3 gene under the abiotic stresses by real-time quantitative PCR. Then, this promoter was used to construct expression vector to start GUS (β-glucuronidas