育龄及胎次与精神分裂症关联的研究.pdfVIP

遗传 HERFDLTAS(3Seiiing)11(1）：21-23一1989 小鼠成纤维f胞早中期染色体标本 制备及G带核型分析 王一平 程在玉 灯中国协和医科大学 ，北京） 目前，由于染色休病、肿瘤及JAtFq定位研究的精确度的提高，不仅要求识别染色体，而且需要明确其 精细的带型结构。本工作介绍一种小鼠成纤维细胞经体外培养获得早中期G带染色体的方法，所得带 烈与目前国际普遍采用的Nesbitt及 Franke标准模式图一致，单倍休帝纹迟300条。本工作特点在于 方法简便..定，带纹清晰，且可用于慢性动物实验。 关键词：小鼠成纤维细胞，同源基因连锁群，G带型 制备小献中期染色体，可采用外周血琳巴 毒尾末端2-3厘米，刀片轻轻刮去毛，勿伤皮 细胞培养的方法，但这种方法的缺点是，(1)血 肤。以下步骤均无菌操作，先切下鼠尾约t厘 谈少且．易凝集}(2)常需分离血浆以减少对细胞 米，置已有 1-2滴培养液的平皿内，经70并酒 灼生长抑制。本研究利用小鼠成纤维细抱短期 精短哲消毒2-3次，移入另一盛有1-2滴培 培养方法，收获前用低浓度秋水仙胺处理，可获 基的平皿内。然后剪切成碎块，用吸管移人一 得大量中期及较多的早中期分裂相。用 GIG 装有小磁球的瓶内，加人胶原酶溶液sml.室温 显带法所得G带型[x.91，单倍体带纹数达300条 下搅拌40-60分钟后，将细胞悬液移人离心管 左右，从而为基因定位及高分辨G带型等研究 中，1000转／分钟离心7-8分钟，弃上清液，加 打下了基础。 培养液3-5毫升，混匀，将细胞悬液移入培养 瓶中，37C05多CO,培养箱中静置4-5天。观 材 料 和 方法 察，换液。根据细胞生长情况，可原代收获或传 一（）动物及试荆 实验动物为昆明及 代。第二，尾细胞碎块培养法。小鼠固定、尾部消 ICR小鼠品系。培基为 DMEM (Dulbeccos 毒、去毛，切下尾末端部等步骤同前方法。将组 ModifiedEagleMedium,GIBCO产品）。培 织剪碎成糊样，用弯头吸管将组织移人培养瓶， 养液合胎牛血清20多，青链霉素分别为100川 使其贴附于瓶壁上，向瓶底加培养液3毫升，置 ml及100jig/ml.L一谷氨酞胺2mM，用碳酸 370C;5外CO,培养箱中约30分钟后，将培养 氢钠调pH至7.0-7.2。胶原酶 (Collagenase, 瓶翻转令培养液浸盖尾组织，静置4-5天。 TypeI,Sigma产品），用不含血清的Eagle或 采用上述两种方法，均能获得 良好的结果。 L-15培基配制1mg/m1溶液，抽滤除菌后，分 一般第一种方法在换液后24小时，或第二种方 装置一20℃保存备用。 WangYipingetat-;TheMethodsofPreparing 二（）细胞培养 采用以下两种方法：第 EarlyMetaphaseChromosomesandtheStudyonTheir 一，尾组织经胶原酶消化后培养法23〔。将小鼠 G-bandingPatternsinMouseFibrob:asts 放置固定器内，露出尾部，用70多酒精棉球消 本文于1987年8月21日收到。 ． 21 ． 法传代后48小时细胞达生长旺盛期，在倒置显 体上 1/2,3A3紧靠着丝粒下方；10号的10 微镜下观察确定细胞收获时机。收获前1小时 B1,IOB2及IOB3位于染色体中上部，IOBI 加人秋水仙胺使终浓度为0.06zjg/ml,常规制 距着丝粒较远。此外，3G下方有3H2及 3H 备染色体标本。 4，而 1