基于rDNA+ITS序列何首乌PCRRFLP分子鉴别.pdfVIP

华南理工大学学报(自然科学版) JournalofSouthChina of V01．37No．6 第37卷第6期 UniversityTechnology 2009年6月 Science June2009 (Natural Edition) 基于rDNA 郑传进1赵树进2’赵振华1呙军1 (1．华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006；2．广州军区广州总医院，广东广州510010) 摘要：对何首乌及其常见混淆品的核糖体DNA内转录间隔区(rDNAITS)序列进行了 测序分析．结果表明：何首乌与其混淆品毛脉蓼、翼蓼及耳叶牛皮消ITSl区的差异率分别 于何首乌及其混淆品的rDNAITS序列的差异，找出一个位于ITS2间隔区的何首乌特征 性NsbI酶切位点，用NsbI酶对何首乌rDNAITS序列扩增产物酶切后得到含约531 bp 和109 bp的两片段的聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)图谱，而其混 淆品的rDNA ITS序列扩增产物不能被NsbI酶切，故图谱呈单一条带．利用建立的PCR— RFLP方法可以很好地区分何首乌及其混淆品． 关键词：何首乌；分子鉴别；核糖体DNA内转录间隔区；PCR—RFLP 中图分类号：R282．5 文献标识码：A 何首乌(Fallopiamultiflora)是一种蓼科植物，重复性和稳定性差等缺点，并且对专家或设备过分 其块根(何首乌)和藤茎(夜交藤)都可作药用．作为依赖一】．因此建立一种简易、客观而稳定的基于物 一种著名的的大宗中草药材，具有抗氧化、抗肿瘤、 种间遗传基因多态性的何首乌分子鉴别技术具有重 降低胆固醇、抑制动脉粥样状硬化、抑菌消炎及增强 要意义． 记忆等功效¨4J．何首乌除作药用外，还在保健品 被子植物核糖体DNA内转录间隔区(rDNA (如首乌酒)、化妆品(洗发水)、饲料添加剂等领域ITS)足药用植物鉴定和品质研究中应用最为广泛的 有广泛的用途．但多种混淆品如毛脉蓼(FallopiaDNA片段之一¨0‘，其在研究属内种间和较近属间 multifloravat．cilliinerve)、翼蓼(Pteroxygonumgiral— 关系时都表现出较高的趋异率和信息位点百分率． dii)、耳叶牛皮消(Cynanchumauriculatum)的存在影这种属内种间或近缘属间核苷酸序列的高度变异也 响r何首乌的用药安全和有效性．何首乌药材的真 极大地丰富了限制性内切酶作用位点的遗传多态 伪鉴定是对其进行质量控制的首要环节． 性．基于这种多态性建立的聚合酶链反应一限制性 现有的何首乌鉴别方法多是基于其外观性 片段长度多态性(PCR—RFLP)技术既可用于分析单 状、显微结构、化学成分等建立鉴别标识b引．这些 个的酶切位点多态性，亦可分析多个酶切位点多态 ITS的比 标识都是物种的遗传表现型，受到遗传因素、生物 性．本研究通过对何首乌及其混淆品rDNA 体的生长发育阶段、生长环境、人类活动等诸多因 较分析，找出何首乌的特征性酶切位点，从而建立何 素的影响¨o，具有很大的变异性，存在主观性强、 首乌的PCR—RFLP分子鉴别技术． 收稿日期：2008—06．05 ％甚金项目：广东省自然科学基金资助项目(6104397) 作者简介：郑传进(1973．)，男，博十生，主要从事药用植物分子鉴别研究．E-mail：z_c_jin@163．tom t通讯作者：赵树进(1958一)，男，教授，博士生导