大豆线粒体细胞色素氧化酶基因分离及序列分析.pdf

摘要 随着水稻、玉米等主要农作物杂种优势利用的成功，大驻已成为少数几个没有丈规模利 壤杂静往势懿囊要撵扔之一，其主要骧嚣是没骞逶于杂交静燕产豹不弯系。鑫筑1993年吉 林省农科院孙斑等发现世界上第一个大豆细胞质雄性不育系以来，该领域的研究和成用迅速 发展，但是对拭细胞质雄性不育的分子机理研究尚属空白。 嚣翦，国内羚关手缨魏震雄蠖不蠢戆瓤理臻究主要集审褒援勃线较俸主。毽貔绫粒蒋基 因组中，编码擞自质的基因有COX、3个细胞色素氧化酶复合物的大亚单位CoxI、CoxⅡ和 rpsl4以及缡褥NADH-糍黪Q氧化还艨酶复舍物麴死令耍攀瞧基因；另羚，还毒线驻体蛋鑫 粒体基因组中逐含有一些功能未知的歼放阅读框(ORF)，并存在大量的非编码序列。 线粒体细黥色素氧化瓣噩基Il(Cox珏)、戴基班(Cox激)是植彩孵吸俸用孛还原氧弱 求分子的重要酶系统成员。君前，已经发现在玉米、矮牵牛、水稻、小麦、高粱、油菜等细 胞质雄性不育系中Cox 相关基因在基圊编码区域、基因组织络构或拷贝数等方蟊与藏常可育保持系舂明显麓异，医 魏攘测这些墓戳可髓与e辩有关。 本实验通过参考大豆绒粒体细胞色素氧化酶驻基II基因和亚基ⅡI基豳序列，设计并合成 保寄基因引物，首次从吉转省农业科学院特有的大豆细胞质不育系和保姆系材料的线较体基 因缀孛扩疆缮弱这嚣个萎鞠，并对基戮亭列骰了裙步的分析。主要结摹细下： ll采用了DNaseI消化法和蔗糖不连续密魔梯度水平超速离心相结合的方法掇取了高 质凝、高纯度的大豆线粒体DNA。 2．建立稳建静大豆线较镩基嚣缝§隧笼R扩灞蒋系。 3．根据GenBank中登泶的大豆细胞质氧化酶距基II基因序列，合成保守引物，从吉林省 农业科学院特有的大豆细胞质不育系和保持系线粒体基因缎中扩增得到豫个细胞魏索氧化 酶驻莲ll基慰，该基因编褥了一个交280令氨蒸黢攘残豹萤自。 4．由于克隆的亚基II基因序列祷度同源且其在供试材料的保持系中克隆到了这个基 因，这表明该糕因可能与大豆细胞质雄性不育有必系。 5，撮摆GenBank孛登慕鹃丈豆绥瓣覆氧纯酪囊基疆基因缪酬，合裁绦守；l貔，铁害辖省 农舭科学院特柯的大豆细胞质不育系和保持系线粒体基因组中扩增得到细胞色素氧化酶亚 基m基因，该基因编码了一个由213个氨基酸组成的蛋白。 6。盘子鼹毙隆弱四个缎魅色素襞豫薅耍基lll蘩因序残藏嶷嗣海，这袋骥该基爨霹襞与大 豆绷胞质雄性不育没有直谈豹关系。肖关大豆细脓质雄性不育的分子机联还有待于进一步的 线粒体功能基因组学来揭永。 关键诵：大豆；臻照震雄谯不弯；Cox珏：CoxIrI Abstract Isolationand of Genes CoxlI，CoxlII SequenceAnalysis in male sterility Cytoplasmic soybean Abstract male isa of functional sterility(cMS)inplantphenomenonfailingt。9reduce Cytoplasmic inthecourseofsexual isa encounteredin pollen propagation．Itfrequently phenotypeflowering hasbeenfound wasfirstobservedinflax,and in 1921，CMS so觚it maize