灵芝原生质体的制备与再生研究.pdfVIP

· 中草药 · 北方 园艺2013(16)：184～188 灵芝原生质体的制备与再生研究 王 昱，王 义，王 康 宇，叶鹏 飞，孙 春 玉，张 美 萍 (吉林农业大学 生命科学学院，吉林 长春 130118) 摘 要：以泰山灵芝为试材，研究了茵龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解 pH、渗透压稳定 剂对灵芝原生质体制备和再生的影响。结果表明：茵龄为7d，以甘露醇为渗透压稳定剂，采用酶 浓度2．0 的溶壁酶，pH 为6．0，31℃条件下酶解2．5h为灵芝原生质体制备的最适条件；并在原 生质体再生固体培养基(以0．6mol／L蔗糖为渗透压稳定剂)上，原生质体的再生率最高。 关键词：灵芝；原生质体；制备；再生 中图分类号：S567．3 1 文献标识码：B 文章编号：1001--0009(2013)16一Ol84一O5 灵芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍贵药 研究等奠定基础。 材被誉为 仙“草”、“百草之王”，具有很高的药用价值和食 1 材料与方法 用价值。目前已知灵芝属有 100多种 ，灵芝含有有机锗、 1．1 试验材料 高分子多糖、灵芝酸及腺嘌呤核苷等生物活性成分[】]。 泰山灵芝 (Ganodermalucidum)菌株购 自吉林农业 现代医学通过大量的药理和临床试验已经证明，灵芝对 大学菌物研究所 ，菌种保藏在PDA斜面培养基上，培养 多种疾病，尤其是癌症、心脏病 、脑血栓等严重威胁人类 温度28℃，保藏温度4℃。培养基：斜面培养基PDA：马 生命的疾病具有十分显著的疗效口]。高等担子菌原生 铃薯 200g、葡萄糖 20g、KH2PO43g、MgSO4 ·7H2O 质体的研究，始于 1972年对裂褶菌原生质体的分离[3]。 1．5g、VB1500mg、琼脂 15g。菌丝生长液体培养基 近 10a来对于灵芝原生质体的分离已有报道，这为以原 PDA：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、KH2PO43g、MgSO4· 生质体为媒介的生物技术试验提供了理论依据。现以 7H2O1．5g、Ⅶ 1500mg。原生质体再生 固体培养基 泰山灵芝为试材，研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解 MYG：葡萄糖 4g，麦芽糖 10g，酵母粉 4g，琼脂粉 温度、酶解 pH、渗透压稳定剂对灵芝原生质体制备和再 15g。酶制剂：溶壁酶购 自上海源叶生物科技有限公司， 生的影响，以期为后续灵芝原生质体的融合和基因工程 使用时溶于 0．6mol／L渗透压稳定剂甘露醇中，调节 pH值，并由高压灭菌的0．45 m微孔滤膜过滤除菌，现 第一作者简介：王昱(1987一)，女，硕士研究生，研究方向为植物细 用现制以保证酶活。渗透压稳定剂：0．6mol／L甘露醇， 胞工程 。E-mail：247989080@qq．com． 0．6mol／L蔗糖 ，0．6mol／L葡 萄糖，0．6mol／LKC1， 责任作者：张美萍(1966一)，女 ，博士 ，教授 ，研究方向为药用植物细