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第40卷第 12期 东 北 林 业 大 学 学 报 Vo1．40No．12
2012年 l2月 JOURNALOFN0Rm EASrFORESTRYUNIVERSHY Dec．20l2
毛 白杨 MSAP体系优化及 DNA甲基化的初步分析 )
马开峰 匾 王斯琪 宋跃朋 张德强
(林木育种国家工程实验室(北京林业大学)，北京，100083)
摘 要 首次利用MSAP技术开展毛白杨DNA甲基化研究。在优化选择性扩增体系的基础上，对毛 白杨亲
子代的CCGG位点甲基化相对水平、CCGG位点胞嘧啶 甲基化模式的遗传变异进行 了初步分析。结果表 明：① 引
物H／M+3、引物E+^+2、dNTP、 酶、预扩增产物稀释倍数分别为0．03nmol、0．03Illsol、0．20mmol／L、1u(或 1．5
u)、40倍时组成的20 L反应体系经PCR扩增后电泳，可得到品质最佳的银染谱带。②毛白杨CCGG位点甲基化
相对水平约为26．75％～29．39％，CNG甲基化相对水平低于CG甲基化相对水平 ，子代的甲基化相对水平低于亲
本的甲基化相对水平。③子代中发生遗传变异的CCGG位点数之比为 1：1。遗传 自亲本的CG甲基化位点数高
于遗传 自亲本的CNG甲基化位点数，遗传 自父本的甲基化位点数高于遗传 自母本的甲基化位点数；子代甲基化位
点的变异以去甲基化为主，发生CG甲基化变异的位，占’数与发生CNG甲基化变异的位点数之比为 1：l。
关键词 毛 白杨；甲基化敏感扩增多态性(MSAP)；DNA甲基化 ；相对水平；遗传变异
分类号 $722．3+4
OptimizationofM SAP System and PreliminaryAnalysisofDNA MethylationinPopulustomentosa／MaKaifeng．
ZhangZhiyi，WangSiqi，SongYuepeng，ZhangDeqiang(NationalEngineeringLaboratoryforTreeBreeding，BeijingFor-
estry University，Bering100083，P．R．China)／／JournalofNortheastForestryUniversity．一2012．40 (12)．一1～7
Methylation-SensitiveAmplifiedPolymorphism (MSAP)techniquewasusedfirsdytodetectDNAmethylafioninPop．
ulustomentosa．nadtheselectiveamplificationsystemwasoptimized．TherelativelevelofDNA methylafioninCCGG sites
0fP．tomentosa．1，P tomettto$~-2and theiroffspringP×tomentoact．151wasstudied．Also．heredity andvariation of
CCGG cytosinemethylationpatternsbetweenparentsandtheiroffspringwereanalyzed．Resultsshowedthebestqualitysil
vers~aimngbnadswoIlldbe gotfrom the2O “Lselectiveamplificationsystem，including0．03nmol／LH／M ，primer，
O．03nmol／LE+^+2primer，0．2mmoVLdNTP，1U(or1．5U)Taqenzymeand4IxL40timesdilutionofhtepre．amplifi．
cationproduct．respectively．Inbothparentsandoffspring．relativelevelof methylatedCCGG was26．75％ 一29．39％．
TherelativelevelofCNG
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