放线菌709084除草活性代谢物的分离纯化、结构鉴定及研究.pdfVIP

中国化工学会农药专业委员会第十四届年会论文 陶黎明L2，周瑜1，王丽云1，徐文平1～， (1．华东理工大学上海市化学生物学(芳香杂环)重点实验室，上海，200237； 2．上海南方农药研究中心，上海，201702；) 摘要：从青海省高原地区采集的土壤里筛选出一株能够产生除草活性物质的放线茵，菌号为709084。通过 对发酵液萃取、柱层析、薄层层析、高效液相色谱等方法分离得到一种具有除草活性化合物，命名为 构相同。该化合物在低浓度下可使杂草白化和黄化，高浓度时抑制种子萌发，盆栽测定证实此化合物在高 浓度时具有苗前和苗后的除草活性，经定量测定发现此化合物可明显地抑制植物体内叶绿素的生物合成， 减少其生成量。 关健词：代谢产物；鉴定；吲哚霉素：萌发；除草；叶绿素 二十世纪以来，随着人口的增加，增加粮食产量成为全世界共同面对的问题，除草剂的 大范围使用一方面对防除农田杂草、节省劳动力、提高农业劳动生产率、确保农业丰收起作 非常重要的作用，同时也造成了一些负面影响，比如农药残留等问题。为适应农业生产和环 保的需求，开发新型效果好而又易分解、无残留的新型除草剂成为该领域研究的热点之一。 早在1970年日本的田村竹松【1】等人发现了第一个具有除草活性的微生物代谢产物放线菌酮。 绿素是植物叶绿体内进行光合作用的主要色素，是一类含脂的色素家族，位于类囊体膜上。 叶绿素吸收大部分的红光和紫光但反射绿光，所以叶绿素呈现绿色，它在光合作用的光吸收 中起核心作用。叶绿素为镁卟啉化合物，它的功能是捕获光能并驱动电子转移到反应中心【3】， 因此它对植物的生长及农作物产量具有极其重要的作用。在植物体中，叶绿素生物合成过程 中不同酶活性的降低或缺失【4】，会导致叶绿素含量降低，叶色表现出黄化、白化、苍绿色等 症状，光合作用效率降低，生长迟缓，甚至会导致植株死亡。 我们在微生物源农药的筛选中，从青海省采集的土壤中分离得到一株编号为709084的放 线菌，其发酵液对禾本科杂草具有良好的生长抑制作用并对植株有很强的黄化和白化作用。 通过多种色谱层析技术的应用，分离提纯得到活性化合物，经过紫外全波段扫描、质谱、 定和除草等生物学试验的结果。 中国化工学会农药专业委员会第十四届年会论文 1材料与方法 1．1菌种及杂草种子 放线菌709084分离自青海省高原地区的土壤中，在高氏斜面上28℃培养至孢子丰满后 备用。杂草种子[(稗草(EclinochloacrusgalliL)、马唐(Digitariasanguinalis L)、苋菜(AmaranthusL)、小藜 gniculataBeauv．)、锂肠Ecliptaprostrate mangostanus acuminatum ChenopodiumL)】由上海南方农药研究中心提供。 1．2培养基及培养方法 压湿热灭菌20min。在250mL三角瓶中装入50mL培养基，灭菌后于无菌室接入斜面种子， 28℃、220 d。 r·min。1振荡培养4 1．3试剂、仪器与设备 高速冷冻离心机(HITACHI)；紫外全光谱扫描仪(SHIMADZU 1100 101．t m4．6 谱仪(AgilentTechnologiesseries)；分析液相色谱柱(依利特C18 COSMOSIL 5C18．MS 口HPLC纯试剂。 1．4活性物质分离提纯及结构鉴定16】 发酵培养后的发酵液，5000r·min。1离心10min，上清液用正丁醇萃取两次。减压浓缩 有机相至棕黑色油状物，少量甲醇溶解，过滤除去不溶物。减压浓缩除去甲醇，得到黄褐色 油状物。将该粗提物上硅胶柱层析，以不同浓度比率的甲醇和氯仿系统洗脱(甲醇与氯仿体积 到淡黄色固体。甲醇溶解，再用薄层层析进一步分离纯化，在紫外下刮下活性条带，甲醇溶 解，过滤后浓缩，再用少量甲醇溶解，在制备型HPLC上分离纯化，浓缩得到淡黄色固体， 代号为709084A。通过紫外全波长扫描确定其特征峰，根据质谱确定分子量，然后采用核磁 共振(NMR)进行结构测定，结合谱图分析确定结构。 1．5种子萌发试验