猪圆环病毒2型ORF2%2f猪白介素2嵌合基因真核表达载体的构建、表达及在动物体内的免疫效果研究.pdfVIP

病毒病 3讨论 目前PCV2在世界范围内广泛存在，由其引发的疾病，给养猪业带来重大的经济损失。虽然国 免疫系统所致。所以，现有的疫苗还尚未达到理想的效果。对该病的预防与控制仍是世界各国所面 临的难题。因此，快速、敏感、特异的检测方法的建立和高效疫苗的研制是当务之急。有研究者等 用杆状病毒和质粒载体表达了ORFl、ORF2，发现PCVl ORF2虽与PCV2ORF2抗原性相关。但只 有PCV2 的进行提供了理论依据。 本研究根据根据GenBank中己发表的PCV2ORF2基因序列，在ORF2基因的上游和下游分别 析表明，该基因在大肠杆菌中成功地得到了表达，经Western．blot免疫检测表明，表达的重组蛋白能 被PCV2多克隆阳性血清所识别。具有良好的反应原性。ORF2重组蛋白可以作为抗原进行PCV2 抗体的诊断，这为间接ELISA检测方法和猪圆环病毒II型特异性单克隆抗体的制备打下了坚实的基 础。 参考文献(略) 猪圆环病毒2型ORF2／猪白介素2嵌合基因真核表达载体的构建、 表达及在动物体内的免疫效果研究 昊志明·，闫若潜，贾松涛，赵雪丽，张志凌，张健 (河南省动物疲病预防控制中心，郑州 河南450008) extension．PCR， 摘要为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗，本研究采用重叠延伸PCR(splicingbyoverlap rpcDNA3．I／PCV2．1inker-PolL-2和只舍PCV2 学活性； 抗体水平明显高于fpcDNA3．I／OFR2． 关键词猪圆环病毒2型、猪白介素2．嵌舍基因．核酸疫苗，免疫效果 circovirus 猪圆环病毒2型(Porcine 2，PCV2)属于圆环病毒科，圆环病毒属，为无囊膜单 type 链环状DNA病毒。大小约为1．7 的重要抗原基因，编码病毒的衣壳蛋白(Cap蛋白)，在Cap蛋白上存在抗原表位，具有免疫原性， 因此ORF2基因成为建立PCV2特异性血清学检测方法及核酸疫苗研究的目的基因。白细胞介素2 增殖，参与机体的体液免疫应答，促进抗体分泌。IL．2可作为佐剂增强DNA疫苗诱导的体液和细胞 免疫反应作用，提高DNA疫苗的免疫效果和保护率，降低疫苗使用剂量，增强疫苗在动物体内的免 疫效果。 l由PCV2病原引起的猪圆环病毒病给养猪业造成了巨大危害。当前国内外尚没有PCV2疫苗可用。 overlap 本研究采用重叠延1*PCR(splicingby ·作者简介： 吴志明(1964一)，男。博士，研究员，研究方向：动物疫病防控技术研究 466 第三届猪病防控学术研讨会会议论文集 将PCV2的ORF2全基因(PCV2／ORF2)与猪白介素2(Porcine 鉴定，为进一步研$IJPcv2基因工程核酸疫苗奠定基础。 1材料和方法 1．1材料 含PCV2 均购自大连(宝)生物工程有限公司。PorcineIL．2 试验动物中心。 1．2方法 1．2．1引物的设计与合成 HI 和HindHI酶切位点。 1．2．2PCV2．1inker-PolL-2嵌合基因的构建 DNA 采用P1／P2引物对，以pGEM．T／ORF2重组质粒为模板，按照PyrobestTMPolymerase说明书 DNA pGEM-T／PolL-2重组质粒为模板，按,照PyrobestTM PCR产物。将上述二个回收产物混合，取0．3 接模板，反应条件为94℃预变性2min后，94℃变性1 min， min，