有机锡化合物的细胞毒性研究.pdfVIP

S02-105有机锡化合物的细胞毒性研究 * 严雪婷，孙 婧，何 滨 ，江桂斌 （中国科学院生态环境研究中心, 环境化学与生态毒理学国家重点实验室北京，100085 ） 有机锡化合物作为一类有机金属化合物，被广泛应用于杀菌剂、杀虫剂、木材防腐剂、 [] 聚合物稳定剂和催化剂以及轮船防污剂 。作为目前已知内分泌干扰物中唯一的金属化合物， 有机锡化合物能够引起某些生物的生殖逆向性变化。目前，已有文献报道，有机锡化合物可 [] 以和蛋白酶体相互作用，从而影响相关过程的蛋白表达，对生物体产生毒性 。 实验选取人肾上腺皮质癌细胞(H295R)作为暴露细胞，该细胞能生成肾上腺合成的所有 类固醇激素，并与正常的人肾上腺细胞对外源化合物的反应一致，因此成为研究内分泌干扰 机制的理想离体模型。H295 细胞培养至细胞呈梭形、饱满后进行有机锡化合物的暴露， 将不同浓度(50ppb、100ppb、150ppb、200ppb 、300ppb) 的三丁基锡、三苯基锡和二丁基锡 以千分之一的体积比分别加入到培养基中，以等体积的甲醇作为对照组，对细胞进行24 小 时的避光暴露。暴露结束后用甲醇氯仿法提取细胞蛋白，并储存于-80℃。 二维凝胶电泳(2-DE)技术凭借其高通量、高灵敏度、高分辨率和重复性好，已成为蛋 质组学研究中最常用的蛋白质分离技术。2-DE 进行蛋白分离前，先利用 2D-quant 试剂盒进 行蛋白的定量测定，第一向等电聚焦电泳所需的蛋白上样量为 350μg ；随后进行第二向聚丙 烯酰胺十二烷基硫酸钠凝胶电泳使蛋白得到分离；使用图像扫描仪获取 2-DE 图谱，利用软 件比较暴露组和对照组电泳图谱中的差异蛋白质点，根据蛋白点在 2 倍以上上调或者 2 倍以 下下调的点为第一选点标准，再结合图谱中胶点的深浅和大小识别选取差异表达的蛋白点； 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)仪得到差异蛋白的相应肽质量 指纹谱(PMF)，并借助Mascot 软件结合 NCBInr 数据库进行检索鉴定相关结构蛋白质。 通过对 2-DE 凝胶图谱的分析，共有 703 个蛋白点被识别，将对照组和暴露组进行比对， 可以得到 17 个蛋白表达上调，36 个蛋白表达下调。通过对差异蛋白的质谱鉴定，最终得到 4 个上调蛋白和 8 个下调蛋白的相关结构信息。其中胶质细胞成熟因子、巯醇蛋白酶和溶酶 体蛋白酶 Cathepsin B 与肿瘤的侵入和转移相关；线粒体膜 ATP 合酶和过渡期内质网 ATP 酶参与 ATP 相关合成；热激蛋白可以维持蛋白的空间构象和生物活性；内质网蛋白和波形 蛋白能够维持细胞器稳态；硫氧化还原蛋白与细胞的氧化还原过程相关。综上，有机锡化合 物能够影响 H295 细胞激素的合成、氧化还原反应、蛋白的相关表达、以及细胞器和大分 子的组装，从而产生细胞毒性。 基金项目：国家自然科学基金（No.） 参考文献 [1]Fent, K., Ecotoxicology of organotin compounds. Crit Rev Toxicol, 1996. 26(1): p.1-117. [2]Nakatsu, Y., et al.,Activation of AMP-activated protein kinase by tributyltin induces neuronal cell death. Toxicology and Applied Pharmacology, 2008. 230(3) :p.358-363