STR图谱分析方法用于细胞库中人源细胞的鉴别研究.pdfVIP

STR图谱分析方法用于细胞库中 人源细胞的鉴别研究 吴雪伶 冯建平 吴 瑜 樊金萍 孟淑芳 李德富 中国药品生物制品检定所细胞室——卫生部国家生物技术产品质量标准化重点实验室，北京，100050 摘要 目的采用STR图谱分析的方法，建立本单位细胞库中所有人源细胞的鉴别图谱， 并进行细胞交叉污染及细胞误判现状分析的研究。方法采用16个位点的STR图谱分析方 法，检测本单位细胞库中所有收集保存的及其他单位来源的共计61株人源细胞，并将STR图 谱检测结果与目前国际细胞库公布的数据进行比对，分析细胞的正确性及交叉污染情况。对 未检出信号的细胞株，采用同工酶法对细胞的种属进行鉴别。结果被检测的61株细胞中，41 株细胞呈现特征性STR图谱，不存在与其他细胞的交叉污染现象，其中36株细胞与ATCC 或JCRB保存的同一名称细胞在相应的9个STR位点的数据完全一致，5株细胞均仅在vwA 位点与ATCC数据不完全相同，可判定为正确细胞；7株细胞尚无国际可比对数据，但STR图 谱特异，可认定为新建细胞。11株细胞(占17．7％)被鉴定为错误的细胞，其中舌癌细胞 S3 细胞的数据完全一致；2株HuT一102的数据与ATCC的数据完全不同；4株细胞未检测到信 号，同丁酶结果显示均为鼠源细胞；同时还发现2株细胞为交叉污染细胞。结论细胞误判及 细胞交叉污染现象较为严重，正确鉴别细胞，特别是对国内自建细胞重新鉴定对保证科学研究 的可信性及可重复性极为重要。 关键词STR图谱；细胞库；细胞鉴别；交叉污染；细胞误用 细胞被广泛应用于基础生物学研究、生物制品 我室细胞库自1996年开始建立，多年来从不同 生产等领域，发挥着不可替代的作用。但长期以来， 来源收集了多株细胞，不仅包括科学研究用细胞，而 细胞交叉污染、细胞误判或误用的情况一直存在，近 且还包括多种生物制品检定用细胞。由于我国实验 年来已经引起了学术界的广泛关注fl。5J。随着细胞 细胞来源及使用较为混乱，对我室细胞库中收集的 鉴别技术的不断发展，特别是STR鉴别技术的发 所有人源细胞，按照国际发展的要求，重新进行鉴别 展，多个国际细胞保藏中心，如美国ATCC、日本研究，对保证细胞库细胞正确性极其重要。因此，在 我们前述工作的基础上mJ引，开展了对我室细胞库 JCRB、欧洲ECACC及德国DSMZ等均对各自保藏 的人源细胞开展了重新鉴定研究[6。8]，发现多株误判 中保存的所有人源细胞及来自其他细胞保藏中心的 或误用细胞，而且多株细胞被重新定义L2’9。10|，同时， 部分人源细胞采用STR图谱技术重新进行了鉴别 各细胞中心将误判细胞在其网页上公布，大力呼吁 研究，以初步探讨我国细胞交叉污染及细胞误判的 研究者使用正确细胞。 现状。 tandem 短串联重复序列(Short repeat，STR) 材料和方法 由于其具有高度特异性及多态性，使得STR图谱检 测方法能够成功应用于人源细胞的鉴别工作[1¨，由 1．细胞待检的42种61株细胞分别来自5个 于它可以赋予每一种人源细胞特定的身份证明，因 细胞库(见表1)，其中41株为我室细胞库(A)保存， 此为科研及生产用细胞的准确性提供了有力保障。 9株来自武汉细胞库(B)，6株来自上海细胞库(C)， 4株来自沙东生物公司细胞库(D)，1株来自第四军 基金项目：国家科技支撑计划。生物制品安全性评价技术及原辅 医大学细胞库(E)。 料安全性研究一生物制品生产用细胞基质安全性研究” (