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影响酶活性的因素 实验三组 一、实验目的 通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。（以唾液淀粉酶为例） 二、实验原理 二、实验原理 二、实验原理 在不同的温度、pH、及添加激活剂和抑制剂的条件下，将唾液淀粉酶加入到淀粉溶液中，作用一定时间以后，取出反应液，加入碘指示剂，比较各种条件下，反应液与碘反应后颜色的差异，由此说明淀粉酶活性的变化。 二、实验原理 班氏试剂：即本尼迪特试剂（Benedict），是斐林溶液的改良试剂，与醛或醛（酮）糖反应也生成Cu2O砖红色沉淀。它是由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配置成的蓝色溶液。 柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐，在水中它们均可水解产生OH-，与柠檬酸钠-碳酸钠溶液和CuSO4溶液混合时，Cu2+和OH-结合，生成Cu（OH）2，Cu（OH）2与葡萄糖中的醛基反应生成红黄色沉淀。 优点：可以存放备用，避免斐林溶液必须现配现用的缺点。 三、实验试剂及器材 1.试剂 碘液 蒸馏水 班氏试剂 0.1% NaCl 1%淀粉溶液 0.1% CuSO4溶液 pH5.0、pH6.8、pH8.0磷酸盐缓冲液 四、实验流程 1. 唾液淀粉酶的制备 取干净的水杯，盛上蒸馏水。 用蒸馏水漱口。 口含约20ml蒸馏水，1-2分钟后，吐入一干净烧杯中，棉花过滤。 酶的特异性 1. 制备稀释唾液。 2. 取4支试管，编号，按下表操作 五、实验结果 根据实验结果，说明各种因素对唾液淀粉酶活性的影响情况。 * * 唾液淀粉酶可以分解淀粉 淀粉(与碘呈蓝色) 紫色糊精(与碘呈紫色) 红色糊精(与碘呈红棕色) 无色糊精(与碘不呈色) 麦芽糖 麦芽糖 麦芽糖 麦芽糖 2.器材 电炉 制冰机 白瓷板 恒温水浴锅 试管、滴管 20 20 20 班氏试剂 1 2 3 各管混匀后，置37℃ 水浴中保温10min - 10 10 5 - 10 - 10 - 5 10 - 10 5 - 1%淀粉 1%蔗糖 pH6.8缓冲液 稀释唾液 煮沸的唾液 管 号 试剂（滴） 3. 将上述各管放沸水浴中煮沸3~5 min，观察记录结果 1. 制备稀释唾液。 2. 取3支试管，编号，按下表操作 100℃ 冰水 37℃ 37℃ 保温 10滴 10滴 10滴 - 稀释 唾液 - - - 10滴 蒸馏水 100℃ 10滴 30滴 4 冰水 10滴 30滴 3 37℃ 10滴 30滴 2 室温 10滴 30滴 1 混匀后, 预温10min pH6.8缓冲液 1%淀粉 管号 3. 以2号管为标准管每隔2min做碘反应。到接近浅红时，取出各管，分别做碘反应,观察结果。 4. 将4只试管均放入37℃水浴中，5-10min取出各管，分别各取1滴做碘反应，观察结果。 温度对酶活性影响 pH对酶活性影响 6.8 8 6.8 5.0 6.8 pH 10 30 5 10 10 10 10 磷酸盐缓冲液 30 30 30 30 1%淀粉 4 3 2 1 管 号 试剂（滴） 制备稀释唾液。 取5支试管，编号，按下表操作 以5号管为标准管，加10滴稀释唾液放37℃水浴中，测定淀粉水解所需时间。 4. 1号管加10滴蒸馏水，2~4号管加10滴稀释唾液，以1min间隔，取样，做碘反应。 5. 观察各管颜色，确定其最适pH。 激活剂和抑制剂对酶活性影响 制备稀释唾液。 取3支试管，编号，按下表操作 5滴 5滴 5滴 稀释 唾液 - - 5滴 蒸馏水 5滴 - - 0.1%CuSO4 - 5滴 10滴 3 5滴 5滴 10滴 2 - 5滴 10滴 1 0.1%NaCl pH6.8缓冲液 1%淀粉 管号 3.将3只试管均放入37℃水浴中，以1号管为标准管每隔2min做碘反应。到接近浅红时，取出各管，分别做碘反应,观察结果。 操作注意事项： 1. 唾液稀释（方法） 2. 要求器材干净，避免杂质干扰。 3. 取样体积尽可能准确。 4. 准确计时和依次加液，各管反应时间应严格控制一致。 *