高粱5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因(EPSPS) 叶绿体转运肽(CTP) 的克隆及其在转基因玉米中的功能验证.pdfVIP

Online system: 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2013, 21(9): 1009~1018 DOI: 10.3969/j .issn.1674-7968.2013.09.001 研究论文 Article 高粱5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因(EPSPS) 叶绿体转运肽 (CTP) 的克隆及其在转 因玉米中的功能验证 赵海铭 宋伟彬 赖锦盛* 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室及国家玉米改良中心，北京100193 *通讯作者，j lai@ 摘 要 5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)催化莽草酸-3-磷酸(S3P)与磷酸烯醇式丙酮酸(PEP) 合成5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸(EPSP) ，具有与草甘膦结合的活性位点，且结合后会抑制EPSPS 的活 性，在植物抗除草剂基因工程中具有重要的应用价值。为了培育抗草甘 玉米(Zea mays) ，本研究通过对 高粱(Sorghum bicolor)EPSPS 因的结构分析，克隆了该基因5 端的叶绿体转运肽(chloroplast transit peptide, CTP) 。将该转运肽与来源于农杆菌(Agrobacterium tumef aciens) 菌株CP4 EPSPS 基因整合，以 Ubiquitin 为启动子，35S polyA 为终止子，构建表达载体，同时以不含有转运肽的CP4 EPSPS 基因为对照， 遗传转化玉米得到稳定转基因株系；用PCR、Southern blot、ELISA 等方法检测转基因玉米CP4 EPSPS 因的表达量并对其进行草甘 抗性检测，研究发现，不含转运肽的转化事件虽然CP4 EPSPS 基因表达量 与含有转运肽的基本一致但却不具有草甘膦抗性，而含有转运肽的转化事件则抗性明显。说明转运肽并 不影响CP4 EPSPS 基因的表达，但对转基因植株草甘膦抗性起着重要作用，说明本研究克隆的叶绿体转 运肽能够正常行 其生物学功能。研究结果为利用EPSPS 基因培育抗草甘 作物提供了重要参考资料。 关键词 叶绿体转运肽，高粱，5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶，转 因，玉米 Cloning of Sorghum bicolor Chloroplast Transit Peptide (CTP) of 5- enolpyruvylshikimate-3-phosphate Synthase(EPSPS) and Its Functional Validation in Transgenic Maize(Zea mays) ZHAO Hai-Ming SONG Wei-Bin LAI Jin-Sheng* State Key Laboratory of Agrobiotechnology, National Maize Improvement Center, China Agricultural University, Beijing 100193, China * Corresponding author, j lai@ Abstract 5-enolpyruvylshikimate- 3-phosphate synthase(EPSPS), which has an active site with glyphosate, can catalyze 5- enolpyruvylshikimate- 3- phosphate(EPSP) synthesis with shikimate- 3- phosphate(S3P) and phosphoenolpyruvate(PEP), and the enzyme activity can be inhibited when combine with glyphosate which are important in herbicide resistance genetic engineering of plants. To cultivate the maize(Zea mays) having resistance to glyphosate, we cloned Sorghum