禾谷缢管蚜体内的病毒结合蛋白基因的克隆与原核表达.pdfVIP

卷 期 ! ! 微 生 物 学 报 %’ (! . (! 年 月 ## $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+*,- ## !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 禾谷缢管蚜体内的病毒结合蛋白基因的克隆与原核表达 3 3 3 吴云锋 崔晓锋 林 林 周广和 3 （西北农林科技大学 杨凌 133## ）（中国农业科学院植物保护研究所 北京 3###0! ） 摘 要：利用一对特异性引物，用HIJ 的方法从禾谷缢管蚜体内扩增出了病毒结合蛋白基 因，序列测定结果表明其长度 为34!1 ?，编码K!$ 个氨基酸，与CDBE8BF 中的禾谷缢管蚜美 国生物型 核苷酸序列同源性为 ，氨基酸同源性为 。构建了 个 !#$%’( +L6M2.N 01 O 01 P! O 原核表达载体并进行表达得到了40FQ 融合蛋白和4/FQ 的非融合蛋白。 关键词：禾谷缢管蚜，内共生细菌，病毒结合蛋白基因，传播 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） R1$4 ) ###324#0 ## #!2#!!$2#K 蚜传病毒有 个属约 种，几乎为害绝大多数农作物并引起严重的病害，如小麦 3/ /34 ［、］ 黄矮病、玉米矮花叶病、油菜及十字花科花叶病，瓜类和番茄花叶病等3 。在田间，蚜虫 是这类病害发生和流行的中心环节。据统计全世界约有 30/ 种蚜虫可以传毒，传毒方式 ［］ / 分为持久性、非持久性和半持久性 。禾谷缢管蚜（ ）以持久性方式传 )$*+(,*-.+$/ +(0. 播小麦黄矮病，流行年份发病率一般为/# O S K# O ，严重的高达 $# O S 0# O ，造成减产 ［］ ! 。吴云锋等（ ）采用免疫金标记（ ）研究了大麦黄矮病毒在禾 # O S /# O 300! 977*B2+’T 谷缢管蚜体内的循回传毒过程，进一步分离纯化了一种与传毒有关的4/ FQ 的病毒结合 ［］ K 蛋白（ ， ） ，本文报道了对该基因的克隆和在原核中的表达。 U9L*, ?9BT9B+ L-D9B %EH ! 材料和方法 ! ! 蚜虫与病毒 供试禾谷缢管蚜（ ）采自杨凌小麦田（即定为杨凌生物型），在防虫 )$*+(,*-.+$/ +(0. 温室内多代转接并将单头虫克隆五代后，饲养于小麦上，收集/ S ! 龄期的无翅蚜冰冻于 冰箱，备用。大麦黄矮病毒（ ） 株系保存在小偃 号麦苗上。 5 1# V EWQ% CH%