鸡破骨细胞分化因子(chRANKL)的克隆、表达和活性分析.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2008,16 (1): 32~36  ·研究论文 · （ 鸡破骨细胞分化因子 ） 的克隆 、 表达和活性分析 *  王 艳， 姚 静 ， 张风荣 ， 侯加法 ** （南京农业大学动物医学院， 南京 210095） ： （ RNA ， 利用 RT­PCR SOE­PCR 摘要 以鸡 ） 成骨细胞 总 为模板 和 技术体外扩增鸡破骨细胞分化 因子 将 （ （ ） 基 因 ， PCR 产物克隆至组氨酸标签 的融合蛋 白表达载体 pET­32a(+)， 在异丙基 ­ ­D 硫代半乳糖苷 IPTG） 诱导 茁   实现了 。结果表 明 ， 凝 下， 的有效表达， 表达产物纯化后稀释成不 同浓度梯度作用成熟破骨细胞观察其生物学活性 胶电泳显示 PCR 扩增产物的长度为 1200bp 左右， 插入片段与 GenBank 上报道 的鸡 序列完全一致。重组表达载体转 ， ，具有特异反 化 BL21后经 IPTG诱导获得大小约为 64kD 的重组蛋 白 Western 印迹表明重组蛋 白能与抗组氨酸抗体相结合 应性； 并且纯化后的蛋白能刺激成熟破骨细胞， 使骨吸收指数呈剂量依赖性增加 ， 表明具有一定的活性。 ： （ ； 原核表达 关键词 鸡破骨细胞分化因子 ）； 基因克隆 中图分类号: S188  文献标识码: A  文章编号: 1006­1304(2008)01­0032­05  Cloning,Expression andBioactivityAnalysisofChicken Receptor  Activator ofNF­ B Ligand 资   （ ） WANGYan,YAOJing,ZHANGFeng­rong,HOUJia­fa**  Using reversetranscription polymerase chain reaction (RT­PCR) and gene splicing by overlap extension (SOE­PCR),  the DNA sequenceencodingthe chickensreceptor activator ofNF ­ B ligand (  ) wasamplified, and then cloned intothe ex­