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29 试验研究 中国动物检疫 年第 卷第 期
2009 26 7
猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因
的克隆与原核表达研究
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刘永宏 ，刘月焕 ，王凤龙 ，韩春华 ，林健 ，王金玲 ，杨龙峰 ，赵丽 ，张秋雨 ，张永富
（1. 内蒙古农业大学动物科学与医学学院，内蒙古呼和浩特 010018；
2. 北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京 100089；3. 北京市延庆县动物卫生监督管理局，北京 102100；
4. 北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司，北京 1000431；5. 内蒙古民族大学动物科技学院，内蒙古通辽 028000）
摘 要：根据GenBank 中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV) 的ORF6 基因序列, 设计合成一对特异性引物, 应
用RT- PCR方法扩增出PRRSV 的ORF6 基因（M基因) 。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET- 32a( +) ，pET- ORF6 重组质
粒转化DH5a 宿主菌后, 经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6 基因序列进行分析。结果表明,
ORF6 基因的原核表达载体构建成功。ORF6 基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96. 0%～100%，与LV株的同
源性为79. 9%，系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。将构建成功的重组质粒pET- ORF6 转化BL21, 诱导后经SDS- PAGE
和West er n- bl ot 分析表明：克隆在HI S 标签的膜基质蛋白基因与HI S 获得了高效表达，表达的融合蛋白HI S- M分子量
约为39kDa ，并且有免疫学反应活性。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；变异株；ORF6 基因；克隆；原核表达
中图分类号：S852. 659. 6 文献标识码：A 文章编号： （ ）
1005－944X 2009 07－0029－04
Cloning and Expression in E.coli of ORF6 Gene of Porcine Reproductive and
Respiratory Syndrome Virus Variant
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Liu Yonghong , Liu Yuehuan , Wang Fenglong ,Han Chunhua , Lin Jian , Wang Jinling ,
3 1 4 5
Yang Longfeng , Zhao Li , Zhang Qiuyu , Zhang Yongfu
(1 College of Animal Science and Medicine, Inner Mongolia Agriculture University, Huhhot 010018 China;
2 Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Beijing Academy of Agriculture and Forestry
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