巧用CurveExpert软件分析ELISA标准曲线拟合方程及数据分析.pdf

维普资讯 ． 428． ~．perimentalLabMed．August2 008,V_oL26jNo4 · 讲 座 · 巧用CurveExpert软件分析ELISA标准 曲线拟合方程及数据 分析 王 伶 杨人强 游志刚 王 卫 中图分类号R446．6．Q337 文献标识码 c 文章编号 1674—1128(2008)04—4028—40 前言 引玉 ．请 同行指点 本文实例是使用 ELISA定量分 ELISA是一种免疫测定技术 ．在临床检验 中主 析风心病人外周血 中BNP后所得数据的分析处理 要通过抗原抗体反应检测体液 中的抗体或抗原性物 2 材料与方法 质 ．ELISA具有高敏感性 ．并可根据呈色的深浅进行 2．1BNP试剂盒 购 自上海贝西公司 定性或定量分析 在科研中．应用各种 ELISA方法 2．2 仪器 酶标仪 定量测定某种细胞 因子或粘附分子等微量抗原、蛋 3CurveExpert软件在分析ELISA结果中的应用 白或抗体很常见 3．1标准曲线数据的采集与输入 1ELISA结果分析产生误差的原因 本例为临床用 ELISA方法检测BMP的结果 ELSIA操作步骤复杂 ，影响反应因素较多．特别 首先新建文件 ．将标准曲线的数据浓度和吸光 是固相载体的包被难达到各个体之间的一致 ．因此 附表 ELISA测定的标准 曲线的数据 在定量测定 中．每批测试均须用一系列不 同浓度 的 参考标准品在相 同的条件下制作标准 曲线 1【1测定 标准品的浓度 0 004 0．2 1 5 25 标准品的吸光度 l_725 1652 1．373 0．568 0199 0．036 大分子量物质的夹心法 ELISA．标准曲线的范围一 般较宽．曲线最高点的吸光度可接近2．0．绘制时常 度输入如EXCEL，X为样本的浓度，Y为光密度，光 用半对数纸．以检测物的浓度为横坐标 ．以吸光度为 密度为处理过的数据(减去试剂空白)，如图 1所示。 纵坐标 ．将各浓度的值逐点连接 ，所得 曲线一般呈 S 3．2 曲线的拟合及方程的得出 形 ，其头 、尾部曲线趋于平坦 ，中央较呈直线 的部分 芏i1． 1mt l峨● r·，dLtt ， ，jt 【．0l， I‘ ·工’ 是最理想的检测区域 测定小分子量物质常用竞争 Dl菌l甚 羞；l{盆{ {l￡i殴；iE 鼍i 法 ．其标准曲线 中吸光度与受检物质 的浓度呈负相 J l Y 二 酗 。 B●， 啪| 1 0 1了2S 关 标准曲线的形